构建过表达载体引物设计

  1. 过表达载体引物设计（在带有强启动子的载体上插入自己的基因）：
    （1）载体同源臂序列（20 bp）+酶切位点序列（6 bp）+目的片段序列（18-22 bp）
    F: 限制性内切酶前面的15-20 bp
    R: 限制性内切酶后面的15-20 bp
    载体同源臂序列取决于酶切位点


    同源臂序列的确定.jpg

    （2）酶切位点选择的原则：
    （3）Primer 5 软件设计目的基因序列
    a. 保证F引物从ATG开始；R引物跨终止密码子
    b. F primer length (18-22/17-23 bp)

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