Gibson无缝克隆总是失败

1个载体连3个片段，都是用pcr方式扩增，能扩出正确条带，回收后还对载体DpnI酶切处理了，加入seamless混合酶50℃反应半小时到50分钟左右，转化涂板能长满板，可就是用验证引物菌P验证没一个有条带的，思来想去查了很多就是不知道问题出在哪里了。请求各路大神帮忙解答一下，谢谢了！

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