H9C2(2-1)细胞是一株由Kimes·B和Brandt·B从BD1X大鼠胚胎心脏组织的克隆细胞株亚克隆得到的细胞株；H9c2(2-1)细胞表现出许多骨骼肌的特性。H9C2(2-1)细胞中的成肌细胞能融合形成多核的肌管，并对乙酰胆碱的刺激发生反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%，H9c2(2-1)细胞融合发生得很快。

H9C2细胞基本信息

细胞名称：大鼠心肌细胞（H9C2）

细胞别名：H9c2 (2-1); H9c2; H9C2

产品货号：TCR-C607

种属来源：大鼠

组织来源：心脏/心肌层

细胞形态：成肌细胞样

生长特性：贴壁生长

培养体系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1%P/S

传代比例：1:3-1:4，每2-3天换液一次

传代周期：48-72 h

培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃

冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存

质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

参考文献：

Kimes BW, Brandt BL. Properties of a clonal muscle cell line from rat heart. Exp. Cell Res. 98: 367-381, 1976. PubMed: 943302

Levy AP, et al. Post-transcriptional regulation of vascular endothelial growth factor by hypoxia. J. Biol. Chem. 271: 2746-2753, 1996. PubMed: 8576250

H9C2细胞复苏

推荐使用海星生物H9C2细胞配套专用培养基货号：TCR-G607

(1) 开启37℃水浴锅。预热完全培养基，提前将细胞从液氮中取出，放于-80℃冰箱，让冻存管中液氮挥发。

(2) 洁净工作台内准备15 mL离心管，加入5 mL预热的完全培养基。

(3) 从-80℃冰箱中取出细胞。快速将冻存管置于37℃水浴锅内，快速晃动，使冻存液迅速融化。

注意: ① 融化过程必须晃动冻存管，保证冻存液融化均匀。晃动时应避免水没过管盖增加污染风险。

        ② 管内冻存液融化至只剩一个约2mm直径的冰晶时，可停止水浴。继续晃动冻存管至冰晶融化。

(4) 用75%酒精消毒冻存管表面。在洁净工作台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至预先准备的离心管内。用少量完全培养基洗涤冻存管1~2次，一并收集至离心管内。

(5) 250 g离心4 min。离心后去除上清。加入2 mL完全培养基，轻柔吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀。（如有台盼蓝可取少量细胞悬液进行染色计数）

(6) 将细胞平均接种到1个T25培养瓶或底面积相当的培养容器中，加入足量完全培养基，摇匀细胞，将培养容器放入培养箱中培养。

(7) 复苏次日，观察细胞状态并换液。

H9C2细胞传代

细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

(1) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗H9C2细胞1-2次。

(2) 加入1 mL 0.25%Trypsin-0.02%EDTA 消化液于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min，然后在显微镜下观察H9C2细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

(3) 按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

(4) 将H9C2细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

H9C2细胞冻存

推荐使用海星一步冻存液（即用型、无血清、无需程序降温）货号：GUCP-R201

待H9C2细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例

(1) 收集H9C2细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，然后进行细胞计数。

(2) 据H9C2细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

(3) 将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

常见问题

(1) H9C2细胞可以传几代?

H9C2细胞系理论上是可以无限传代的，但是研究发现细胞系也会有老化的；收到细胞后自己具体可以传多少代，会受到客户自己养细胞的操作水平技术，操作环境，用的试剂耗材的质量等因素影响。

(2) 为什么H9c2细胞培养长得慢？

这些因素都会影响细胞长得慢

①可能是细胞接种得太少，细胞密度太低。可以先培养，然后消化重新铺瓶，提高密度培养

②操作时力度没控制好，将细胞吹碎，状态变差

③血清质量不好，影响细胞生长

(4) 为什么H9c2细胞培养会出现空泡？

①可能是铺板时铺得不够均匀，局部过于密集，密集地方的细胞就开始状态变差、空泡增多

②也可能是血清差，需要更换优质血清，及时换液。

(5) 为什么会出现细胞表面颗粒较多的现象？

可能是培养环境有问题，可以改用DMEM/F-12培养基培养，传三代后会恢复平整细胞表面。

(6) 为什么细胞状态变差，容易漂？

①可能是血清问题，建议换血清，并注意血清要程序解冻，不能水浴化开

②也有可能是细胞生长密集，需要及时传代，并不是细胞长满才传代，当有个别地方长得过于密集，容易叠加的时候应该就要传代了