生物组织中的DNA经过怎样的“洗礼”，最终在芯片上被“认可”……

一 测序文库

即DNA片段的一个集合，将DNA序列打断后即构成一个文库（提取出的DNA需经过一系列操作才能用于测序）。

1.打断

DNA打断方式：机械法，超声波法和酶切法。从100k-300kbp到较小片段

超声波法打断可设置打断长度如500bp（base pair碱基对，500为峰值，即大部分在500bp左右），那么这个集合就是500bp的文库，常见的有170bp、350bp。

一般1000bp以下为小片段文库

1000bp以下为大片段文库

2.检测

打断过程中要确保DNA没有降解，需对样品进行检测（电泳）

3.回收

打断后需电泳回收一定范围内片段，如500bp文库可回收300-800bp的片段，文库大小值非常重要，又称为插入片段长度insert size，后续序列拼接和短序列比对时会大量用到

回收完文库，进一步“加工处理”

4.加工

3'端加A碱基—平末端变粘性末端——便于进一步连接引物和接头

加测序引物和index标签（6-8bp碱基片段，用于区分不同测序物种，高通量测序，一个芯片可混合测很多物种，需区分）

加adapter接头分为p5和p7,在序列两端（与芯片互补配对，防止DNA片段被冲走）

PCR扩增

扩展：PCR-free文库：顾名思义，就是不使用PCR扩增而直接构建文库，需要特定的试剂盒，这样的文库免除了因扩增导致的错误，没有偏好性，不过成本相对高一些。

二 测序芯片

外表载玻片，实则黑科技，英文名flowcell,中文名测序芯片

八条通道称为8lane,每条lane上下都有化学修饰，种植了很多引物，与p5 p7 接头连接，保证DNA不被流体冲走

1flow * 8lane * 2surface*3swath*16tile=768个“反应堆” 

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