一、物品准备

HBSS（没的话PBS凑合），1640空培，75%酒精（带容器），70μm筛网+注射器手柄，离心管（4/10/50）

胶原酶IV（5mg/ml），DNase I（1mg/ml）

二、实验步骤

【1】消化液配置（每份）

        0.25mL DNase I（1mg/mL）

        0.25mL 胶原酶 IV（5mg/mL）

        2mL  1640空培

        ---------------------------------按n+1份配置

【2】处死小鼠，浸泡75%酒精2min，取出组织放在 4mL离心管（先装1份消化液----2.5mL）

【3】眼科剪剪碎组织

【4】37℃，200rpm 振荡培养箱，45min

【5】消化液过70μm筛网，研磨，HBSS（或PBS）冲洗；

        液体转移到10mL离心管（大管离心兜不住细胞）

【6】1500rpm，5min 离心去上清

【7】（可选）1mL RBC裂解液，静置1min；再加入6mL 1640

【8】1500rpm，5min 离心去上清

【9】5mL HBSS（或PBS）洗（1500rpm，5min）

【10】按需重悬计数，后续操作