一、物品准备
HBSS(没的话PBS凑合),1640空培,75%酒精(带容器),70μm筛网+注射器手柄,离心管(4/10/50)
胶原酶IV(5mg/ml),DNase I(1mg/ml)
二、实验步骤
【1】消化液配置(每份)
0.25mL DNase I(1mg/mL)
0.25mL 胶原酶 IV(5mg/mL)
2mL 1640空培
---------------------------------按n+1份配置
【2】处死小鼠,浸泡75%酒精2min,取出组织放在 4mL离心管(先装1份消化液----2.5mL)
【3】眼科剪剪碎组织
【4】37℃,200rpm 振荡培养箱,45min
【5】消化液过70μm筛网,研磨,HBSS(或PBS)冲洗;
液体转移到10mL离心管(大管离心兜不住细胞)
【6】1500rpm,5min 离心去上清
【7】(可选)1mL RBC裂解液,静置1min;再加入6mL 1640
【8】1500rpm,5min 离心去上清
【9】5mL HBSS(或PBS)洗(1500rpm,5min)
【10】按需重悬计数,后续操作