【实验】组织提细胞(用于流式)

一、物品准备

HBSS(没的话PBS凑合),1640空培,75%酒精(带容器),70μm筛网+注射器手柄,离心管(4/10/50)

胶原酶IV(5mg/ml),DNase I(1mg/ml)


二、实验步骤

【1】消化液配置(每份)

        0.25mL DNase I(1mg/mL)

        0.25mL 胶原酶 IV(5mg/mL)

        2mL  1640空培

        ---------------------------------按n+1份配置

【2】处死小鼠,浸泡75%酒精2min,取出组织放在 4mL离心管(先装1份消化液----2.5mL)

【3】眼科剪剪碎组织

【4】37℃,200rpm 振荡培养箱,45min

【5】消化液过70μm筛网研磨,HBSS(或PBS)冲洗

        液体转移到10mL离心管(大管离心兜不住细胞)

【6】1500rpm,5min 离心去上清

【7】(可选)1mL RBC裂解液,静置1min;再加入6mL 1640

【8】1500rpm,5min 离心去上清

【9】5mL HBSS(或PBS)1500rpm,5min

【10】按需重悬计数,后续操作

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