原理
酵母单杂交（yeast one hybrid）是在酵母双杂交的基础上发展起来的技术，主要用于研究蛋白质和DNA元件之间的相互作用。
真核生物基因的转录起始需转录因子参与，转录因子通常由一个DNA特异性结合功能域和一个或多个其他调控蛋白相互作用的激活功能域组成，即DNA结合结构域（DNA-bindingdomain BD）和转录激活结构域（activationdomain，AD）。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因子，GAL4的DNA结合结构域靠近羟基端，含有几个锌指结构，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点（UGS），而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFⅡD相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中，DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。据此，我们可以将GAL4的DNA结合结构域置换为转录因子编码基因，将顺形作用元件与基本启动子（minimal promoter, Pmin）和报告基因连接。只要转录因子能与目的DNA元件相互作用，即可通过转录激活结构域激活RNA聚合酶，启动子下游报告基因的转录。
