实验结果与预期结果总是不一致?
重复实验结果也不一样?
每当出现这种情况,总是让广大科研工作者心里拔凉拔凉的,到底哪一步出问题了?
当实验结果与预期不一致或无法重复时,先自查——查一下自己的研究样本,特别是细胞培养是否做到位了,第一,通过STR鉴定细胞是否是真的细胞,戳我https://mp.weixin.qq.com/s/fnNCenO8XGTnFtKyF-3JEA,另外还有“一点”需特别注意,因显微镜下很难观察到它,没有视觉,就没有感知,所以它很容易被忽略。
这“一点”就是:支原体污染!
支原体是目前已知一类能在无生命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞型微生物,大小介于细菌和病毒之间,是目前发现的最小的原核生物,大约0.2-0.3um,并能独立生活。支原体因无细胞壁,不能维持固定的形态而呈高度多形性,可为圆形、丝状或梨形。
全世界范围内,不同实验室的科研人员在培养细胞时,发生支原体污染的概率是10%-85%不等。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间,支原体污染能消耗营养物,促进代谢积累,导致pH改变,并改变培养细胞的代谢、增殖特征及形态。因为支原体可以透过滤膜(0.22-0.45 um),因此过滤的方法无法清除支原体,又因支原体无细胞壁,因此靶向细胞壁的抗生素对支原体无效。有的实验室被支原体污染后,该实验室的细胞培养很难进行下去,细胞传代3代以后状态就急剧下滑,无法进行正常实验,有的实验室甚至只能指望换细胞间。
所以在细胞培养过程中如果发现破碎的细胞甚多,培养细胞需要频繁改善营养环境才能支持长期传代培养时,不妨对我们的细胞做个支原体检测。
目前常用的检测方法就是PCR法,简单快速,结果有保障。深圳拓普生物为此推出了支原体检测试剂盒,可检测230余种支原体,包含了污染细胞所有常见的支原体种类,2-3h即可检测您的细胞是否存在支原体污染。
同时,我公司也推出了支原体检测服务,您只需要提供少许样品,我们为您检测是否有污染,为您的科研提供保障。
下图是我公司检测结果展示:
最后,小编提醒大家,如果发现有支原体污染,建议尽快处理掉细胞,防止交叉污染其他的细胞,甚至整个实验室。对于特别珍贵的细胞,及时采用支原体清除剂处理细胞,以去除支原体污染。