Entranster-E电转实验中,对质粒和DNA的要求

1 .电转染实验DNA含量不应过高

电转染时如果电穿孔混合物中DNA含量过高,则可能会导致细胞毒性。这时应减少电穿孔时DNA用量。可使用最终电穿孔体积中浓度为5ug/ml的DNA浓度进行实验。将毒性水平与细胞+Entranster-E溶液对照组实验结果进行比较,以评估DNA转染的效果。

2 .电转染实验中,对质粒DNA要求总结如下:

1)电转染实验时,应使用高纯度、无菌、无内毒素和无污染的DNA;

2)使用氯化铯梯度或阴离子交换纯化DNA为宜;

3)不要使用miniprep试剂盒制备的DNA,因为可能含有高水平的内毒素。

3 .电转染时应避免使用乙醇沉淀法纯化的DNA

4 .电转染实验时,不要使用乙醇沉淀法纯化的DNA。乙醇沉淀产生的高残留盐会改变电流,对电穿孔有害。

5 .电转染时载体序列

电转染实验时,如果载体序列不正确,则电转染的效率会很低,实验前应验证质粒DNA的表达体系是否正确。

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