RNA-seq:由sra到fastq~

首先,在文獻中找到了GSE號,在右上角中的GEO accession中輸入,來到了這一個頁面

GEO頁面

1. 下載表達矩陣

拉到最後,下載GSExxxxxx_RAW.tar

按http

2. 下載原始數據

找到Relation,這時候會出現三種情況:

1)找到sra

點擊sra處,就可進入下一步

2)找不到sra,但是像下圖一樣出現其他GSE號,看文字描述,點擊RNA-seq的GSE號,最後找到sra

點擊GSE178807

3)根本就沒有sra   X_X

在點進GSE號後,還是沒有sra,那就回文獻中仔細看看吧,有可能根本就沒有

附上我的失敗經驗:在下載GEO數據時遇到的各種問題 - 简书

什麼都沒有。。。

點擊了sra後就會進入這個頁面

勾選需要的數據,然後send to-File-RunInfo-Create File

然後就下載了一個csv檔案,如下:

第一列或download_path列

1)利用可以用鏈接下載的軟件(如迅雷):download_path列

打開迅雷,按右上角的+號,選擇添加鏈接


把csv中的download_path全填進去,選好下載路徑設置,然後等就可以了

下載完成後,會得出一堆以lite.1為結尾的檔案,雖然不是.sra,但不影響下一步用fastq-dump

全都是幾GB的,要下載很久

2)用sra toolkit :第一列

1. conda 環境:可以下載anaconda:Free Download | Anaconda

2. 下載sra toolkit github-ncbi-SRA toolkit


下載得到gz檔案後解壓

在終端中(單次下載):

conda activate

cd /xxx/xxx/xxx/sratoolkit.3.0.7-mac64/bin  #進入解壓後檔案的bin中

./prefetch SRRxxxxx  #第一列的號碼


簡單方便快捷的後台下載:

conda activate

cd /xxx/xxx/xxx/GSExxxx  #進入檔案的下載路徑

soft= /xxx/xxx/xxx/sratoolkit.3.0.7-mac64/bin/prefetch  #sra toolkit的路徑

nohup $soft --option-file prefetch.txt &>sam.txt&

有可能出現 ./prefetch.sh: line 1: 19358 Killed: 9

要到設定---私穩與保案---允許從以下來源下載的應用程式 中強制打開

設定

如果還是不行的話,到/xxx/xxx/xxx/sratoolkit.3.0.7-mac64/bin中,用文字編輯打開prefetch文件強制打開。


等sra下載好後,就要轉為fastq:

首先,在終端中以 ls 獲取目錄下的所有文件名,然後放入txt中,但是這樣會有空格,很麻煩,怎麽辦呢?

請無視那兩個.fastq

把頁面拉一下就行了,只會生成一行一個


搞定!

用文字編輯器生成一個sra.txt,把檔案名复制進去

***檔案最後一行要再換行,不然無法讀取最後一個檔案名

一定要一行一個

再用文字編輯器生成一個sra.sh,內容如下所示:

在後台運行的fastq-dump,可以處理txt中的所有文件,輸出在fastq文件夾中

可更改的部分:

第三行  outdir fastq: fastq為輸出文件夾的名稱

第四行 done < sra.txt :sra.txt為上述包含sra檔案名稱的txt

如需.gz ,可以在--split-3後加上 --gzip

while IFS= read -r sra_file

do

     nohup fastq-dump --outdir fastq --split-3 "$sra_file" &

done < sra.txt

將sra.txt與sra.sh放到當前目錄下,回到終端中,輸入以下命令為腳本添加可執行權限

chmod +x sra.sh

再輸入以下命令運行腳本就可以了

./sra.sh

***本菜鳥對Linux了解有限,目前有以下問題:

1. 76個樣本中少跑了一個,不知道為什麼

      *231025已解決:在最後一行要再換行

有時間我再優化一下(頂鍋逃走

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