了解GRO-seq

什么是GRO-seq? 来自灵魂的拷问

GRO-seq (Global nuclear Run-On sequencing)是一种专门测量新生RNA(nascent RNA)的方法。

GRO-seq是RNA-seq的衍生品,旨在通过直接检测新生RNA产物来衡量转录本的表达量。其思路如下:

(1) 停止转录,如液氮速冻;

(2) 提取细胞核;

(3) 标记核苷酸并放回;

(4) 重新转录,合成标记的核苷酸;

(5) 提取新生转录本并测序;

从而获取全基因范围内的参与转录的RNA聚合酶的位置、数量和定位,即所有参与DNA聚合酶位置和定向的高分辨率虚拟图谱。

该技术首发于《Nascent RNA Sequencing Reveals Widespread Pausing and Divergent Initiation at Human Promoters》

google学术显示引用量:1533

谷歌学术

材料:人肺成纤维细胞(IMR90),每个样本2个生物学重复

结果:

(1) 大片段的转录激活与抑制展示

激活和抑制区域是明显区分的(红、蓝比对reads),同时绘制Pol II ChIP信号可以侧面验证Pol II的活性。


(2) TSS侧翼reads比对模式

TSS

TSS作为的转录起始位点,其地位非常具有特殊性,呈现一个很窄的峰,reads在正、负链堆积的模式是相反的,其方向与转录方向是一致的。

3`A

而在基因3`末端的模式却又不同,一个非常看宽广的峰中包含了很窄的峰(正式poly-A剪切的位置),同时聚合酶又在3`短延伸了相当多的长度。


(3) 近端启动子转录与基因活性的关系

近端启动子reads密度与表达的关系

近端启动子reads密度与基因表达的关系


TSS signal

ChIP图谱与GRO-seq信号的关系(H3ac and H3K4me2)

AS: antisense

分析GRO-seq数据 ?

目前有现成的工具、方法、软件

请参考Homer软件:

homerrrrrrrrrrrr

http://homer.ucsd.edu/homer/ngs/groseq/groseq.html

该页面已经写的很详细了,具体分析下期再聊,请自行参考。

参考文献:

1. Nascent RNA sequencing reveals widespread pausing and divergent initiation at human promoters. Science 2008.

2. A Rapid, Extensive, and Transient Transcriptional Response to Estrogen Signaling in Breast Cancer Cells. Cell 2011.

最后编辑于
©著作权归作者所有,转载或内容合作请联系作者
  • 序言:七十年代末,一起剥皮案震惊了整个滨河市,随后出现的几起案子,更是在滨河造成了极大的恐慌,老刑警刘岩,带你破解...
    沈念sama阅读 211,948评论 6 492
  • 序言:滨河连续发生了三起死亡事件,死亡现场离奇诡异,居然都是意外死亡,警方通过查阅死者的电脑和手机,发现死者居然都...
    沈念sama阅读 90,371评论 3 385
  • 文/潘晓璐 我一进店门,熙熙楼的掌柜王于贵愁眉苦脸地迎上来,“玉大人,你说我怎么就摊上这事。” “怎么了?”我有些...
    开封第一讲书人阅读 157,490评论 0 348
  • 文/不坏的土叔 我叫张陵,是天一观的道长。 经常有香客问我,道长,这世上最难降的妖魔是什么? 我笑而不...
    开封第一讲书人阅读 56,521评论 1 284
  • 正文 为了忘掉前任,我火速办了婚礼,结果婚礼上,老公的妹妹穿的比我还像新娘。我一直安慰自己,他们只是感情好,可当我...
    茶点故事阅读 65,627评论 6 386
  • 文/花漫 我一把揭开白布。 她就那样静静地躺着,像睡着了一般。 火红的嫁衣衬着肌肤如雪。 梳的纹丝不乱的头发上,一...
    开封第一讲书人阅读 49,842评论 1 290
  • 那天,我揣着相机与录音,去河边找鬼。 笑死,一个胖子当着我的面吹牛,可吹牛的内容都是我干的。 我是一名探鬼主播,决...
    沈念sama阅读 38,997评论 3 408
  • 文/苍兰香墨 我猛地睁开眼,长吁一口气:“原来是场噩梦啊……” “哼!你这毒妇竟也来了?” 一声冷哼从身侧响起,我...
    开封第一讲书人阅读 37,741评论 0 268
  • 序言:老挝万荣一对情侣失踪,失踪者是张志新(化名)和其女友刘颖,没想到半个月后,有当地人在树林里发现了一具尸体,经...
    沈念sama阅读 44,203评论 1 303
  • 正文 独居荒郊野岭守林人离奇死亡,尸身上长有42处带血的脓包…… 初始之章·张勋 以下内容为张勋视角 年9月15日...
    茶点故事阅读 36,534评论 2 327
  • 正文 我和宋清朗相恋三年,在试婚纱的时候发现自己被绿了。 大学时的朋友给我发了我未婚夫和他白月光在一起吃饭的照片。...
    茶点故事阅读 38,673评论 1 341
  • 序言:一个原本活蹦乱跳的男人离奇死亡,死状恐怖,灵堂内的尸体忽然破棺而出,到底是诈尸还是另有隐情,我是刑警宁泽,带...
    沈念sama阅读 34,339评论 4 330
  • 正文 年R本政府宣布,位于F岛的核电站,受9级特大地震影响,放射性物质发生泄漏。R本人自食恶果不足惜,却给世界环境...
    茶点故事阅读 39,955评论 3 313
  • 文/蒙蒙 一、第九天 我趴在偏房一处隐蔽的房顶上张望。 院中可真热闹,春花似锦、人声如沸。这庄子的主人今日做“春日...
    开封第一讲书人阅读 30,770评论 0 21
  • 文/苍兰香墨 我抬头看了看天上的太阳。三九已至,却和暖如春,着一层夹袄步出监牢的瞬间,已是汗流浃背。 一阵脚步声响...
    开封第一讲书人阅读 32,000评论 1 266
  • 我被黑心中介骗来泰国打工, 没想到刚下飞机就差点儿被人妖公主榨干…… 1. 我叫王不留,地道东北人。 一个月前我还...
    沈念sama阅读 46,394评论 2 360
  • 正文 我出身青楼,却偏偏与公主长得像,于是被迫代替她去往敌国和亲。 传闻我的和亲对象是个残疾皇子,可洞房花烛夜当晚...
    茶点故事阅读 43,562评论 2 349