什么是GRO-seq? 来自灵魂的拷问
GRO-seq (Global nuclear Run-On sequencing)是一种专门测量新生RNA(nascent RNA)的方法。
GRO-seq是RNA-seq的衍生品,旨在通过直接检测新生RNA产物来衡量转录本的表达量。其思路如下:
(1) 停止转录,如液氮速冻;
(2) 提取细胞核;
(3) 标记核苷酸并放回;
(4) 重新转录,合成标记的核苷酸;
(5) 提取新生转录本并测序;
从而获取全基因范围内的参与转录的RNA聚合酶的位置、数量和定位,即所有参与DNA聚合酶位置和定向的高分辨率虚拟图谱。
该技术首发于《Nascent RNA Sequencing Reveals Widespread Pausing and Divergent Initiation at Human Promoters》
google学术显示引用量:1533
材料:人肺成纤维细胞(IMR90),每个样本2个生物学重复
结果:
(1) 大片段的转录激活与抑制展示
激活和抑制区域是明显区分的(红、蓝比对reads),同时绘制Pol II ChIP信号可以侧面验证Pol II的活性。
(2) TSS侧翼reads比对模式
TSS作为的转录起始位点,其地位非常具有特殊性,呈现一个很窄的峰,reads在正、负链堆积的模式是相反的,其方向与转录方向是一致的。
而在基因3`末端的模式却又不同,一个非常看宽广的峰中包含了很窄的峰(正式poly-A剪切的位置),同时聚合酶又在3`短延伸了相当多的长度。
(3) 近端启动子转录与基因活性的关系
近端启动子reads密度与基因表达的关系
ChIP图谱与GRO-seq信号的关系(H3ac and H3K4me2)
AS: antisense
分析GRO-seq数据 ?
目前有现成的工具、方法、软件
请参考Homer软件:
http://homer.ucsd.edu/homer/ngs/groseq/groseq.html
该页面已经写的很详细了,具体分析下期再聊,请自行参考。
参考文献:
1. Nascent RNA sequencing reveals widespread pausing and divergent initiation at human promoters. Science 2008.
2. A Rapid, Extensive, and Transient Transcriptional Response to Estrogen Signaling in Breast Cancer Cells. Cell 2011.