基于Edman降解的蛋白质测序法的应用

分子生物学方法通过对样品基因测序,为获取序列信息提供了一种快速的方法。随着全基因组测序的发展,我们离获知所有基因(也可以说是所有蛋白质)序列信息的距离越来越近。然而,仅仅对基因序列的了解,并不能为我们提供蛋白质功能相关的重要信息,如分子间和分子内二硫化物键合模式、修饰或其他处理方式。蛋白质序列测定则能实现这一目的,并且可以鉴定与特定发展阶段或疾病发生相关的蛋白质。

蛋白质序列测定的最初目的即是为了确定蛋白质的全部或部分序列,以便更好地了解其结构和功能。此方法中,结合其他特性(如蛋白质分子量、PI或数量),仅需几个残基的短序列就可用已知基因序列数据库进行筛选。蛋白质序列测定在保证“生物制药”(分子生物学革命的产物)重组治疗性蛋白质的品质上也扮演着重要角色。


Edman测序反应过程(图片来源:百泰派克)

艾德曼降解法测序(Edman降解法测序)是蛋白质测序常用的方法之一。随着各种质谱方法的不断补充和完善,Edman降解法可用于鉴定蛋白质及其衍生物,根据目标肽到单个氨基酸残基的片段化模式确定肽的序列。Edman降解蛋白质测序法有多种用途:(以下引自百泰派克生物)

(1)验证蛋白表达产物:重组蛋白插入位点和表达顺序是否正确

(2)验证细胞株建立和发酵过程中蛋白产物:验证细胞株建立和发酵过程中蛋白产物N端甲硫氨酸和信号肽是否正确处理;

(3)分析蛋白降解/酶切:对降解/酶切形成的新蛋白片段N端进行分析,确定断裂/酶切位点;

(4)De-novo测序:对于蛋白数据库中不存在的全新蛋白序列进行分析。

作者:西西里的传说

来源:LOFTER

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