构建载体出现问题，有没有大佬救救孩子～

请问一下大家，有没有人碰到这种情况：

构建表达载体时，用的同源重组法，扩出了目的条带，单酶切了载体，也长了单菌落，PCR验证了。但是送测序得到的结果是目的+T载。我不知道是哪里出了问题。是没扩出同源臂吗？还是载体酶切没切开？我重做了两次扩增和酶切结果都一样。所以迷茫了

后来听别人说建议我菌液PCR用载体引物F+目的片段引物R验证，出现条带单一明亮且正确，但是用载体的引物测单向却失败无信号。 测通结果依旧是目的片段+T载体 ，请问大家是哪里出了问题呀？

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