2021-08-24

回顾一下最近两天去实验室所学习到的东西,昨天看了有关转染方面的操作,首先,

1.准备转染所需材料:lip2000  小干扰   optiMEM培养基(无血清的培养基)RNA-free枪尖  无酶EP管(按照所需准备足够数量)

2.给准备好的无酶EP管内加入500ul(由于转染后放置于小皿中)optiMEM培养基,然后一半的无酶EP管中加入10ul的lip2000,剩余一半中一个设为空白对照,其余的都各加小干扰10ul,放置五分钟。其目的在于?之后将含有lip2000的液体加入放有小干扰的管中,充分混匀放置20min。

3.放置4~5小时后补液,补2ml无双抗的培养基。

今天看了病毒转染,回顾一下步骤:(在病毒转染操作的过程中需要关掉风机、空调等设备,所以一般在进行相关操作时尽量选择在无人时操作,以免为他人带来麻烦)

1.准备病毒转染所需材料:病毒原液  基培   polybleme(增强剂)无酶EP管(按照所需准备足够数量)

2.给准备好的无酶EP管内加入1ml基培(目的是无血清以便于病毒更好的转染),之后加入 polybleme(增强剂),(针对要加入的量根据已有的规格需要进行计算,如果是1mg/ml,则需要稀释为5ug/ml),再加入计算好体积的病毒原液(计算公式依据说明书上的来计算)。做好标记。

3.将其放置于孵箱内4个小时,之后补液,补1ml无双抗的培养基?切记:24小时内需要完成换液,换液时可以运用完培,72小时后显微镜下观察是否病毒转染成功,如若不行,则此次实验失败。

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