小动物生物发光活体成像标准操作规程

1.小鼠活体成像实验

a) 把小鼠放入呼吸麻醉机的诱导箱中麻醉;

b) 待小鼠麻醉后,小鼠经腹腔注射方式注射200uL的D-荧光素钾盐工作液,静置2min;

c)把小鼠放进活体成像仪观察仓进行生物发光观察,呼吸麻醉机面罩维持麻醉;

d)打开活体成像仪软件,编辑文件名称,待相机温度降至-60℃以下后才可开始拍摄;

e)曝光时间:若无曝光条件,可选择自动曝光拍摄一张,确定曝光时间后,在统一进行拍摄;

f)拍摄张数:活体成像中不同部位的光信号达到最强稳定平台期(例:腹腔注射D-荧光素钾盐后底物先到达肝脏后扩散到全身,因此通常活体成像中肝脏最先达到最强值后缓慢下降,其余部位缓慢上升),因此根据实验需求确定拍摄帧数

2.小鼠活体成像和离体器官组织成像实验

a)把小鼠放入呼吸麻醉机的诱导箱中麻醉;

b) 待小鼠麻醉后,小鼠经腹腔注射方式注射150uL的D-荧光素钾盐工作液,静置2min;

c) 把小鼠放进活体成像仪观察仓进行生物发光观察,呼吸麻醉机面罩维持麻醉;

d)打开活体成像仪软件,编辑文件名称,待相机温度降至-60℃以下后才可开始拍摄;

e)曝光时间:若无曝光条件,可选择自动曝光拍摄一张,确定曝光时间后,在统一进行拍摄;

f) 拍摄张数:活体成像中不同部位的光信号达到最强稳定平台期(例:腹腔注射D-荧光素钾盐后底物先到达肝脏后扩散到全身,因此通常活体成像中肝脏最先达到最强值后缓慢下降,其余部位缓慢上升),因此根据实验需求确定拍摄帧数

g)待完成全部小动物活体成像后,颈椎脱臼处死小鼠,根据实验需求取出对应的组织器官,滴加D-荧光素钾盐工作液到组织器官上,保证工作液覆盖每个组织器官,确保成像准确。将加好工作液的组织器官放入观察仓内进行生物发光拍摄.

h) 后续步骤同上步骤e)和步骤f)

3. 大鼠活体成像实验

a) [endif]把大鼠放入呼吸麻醉机的诱导箱中麻醉;

b) [endif]待大鼠麻醉后,大鼠经腹腔注射方式注射2mL的D-荧光素钾盐工作液,静置2min;

c) [endif]把大鼠放进活体成像仪观察仓进行生物发光观察,呼吸麻醉机面罩维持麻醉;

d) 打开活体成像仪软件,编辑文件名称,待相机温度降至-60℃以下后才可开始拍摄;

e) 曝光时间:若无曝光条件,可选择自动曝光拍摄一张,确定曝光时间后,在统一进行拍摄;

f) 拍摄张数:活体成像中不同部位的光信号达到最强稳定平台期(例:腹腔注射D-荧光素钾盐后底物先到达肝脏后扩散到全身,因此通常活体成像中肝脏最先达到最强值后缓慢下降,其余部位缓慢上升),因此根据实验需求确定拍摄帧数。

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