外泌体RNA如何提取呢?

产品特点

◎操作简便快速,可在半小时内获得理想的RNA;

◎提取RNA纯度高,无抑制剂,A260/A280为1.8-2.0;

◎产量更高,较国内同类产品高出20%;

◎可用于小量(200μL)血清、血浆、胸腹水、脑脊液、滑膜液、水样等液体样本中游离样本中RNA的提取;

◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂,安全无毒。

产品介绍

BIOG cfRNA Easy Kit是常州百代生物科技股份有限公司研制的专门用于血清、血浆、胸腹水、脑脊液、滑膜液、水样等样本中游离RNA(包括游离肿瘤细胞RNA、microRNA、病毒RNA等)的提取试剂盒。BIOG cfRNA Easy Kit采用了最新的优质进口离子膜,裂解液和洗脱液经过多次优化,能高效地分离RNA。提取得到的RNA较其它品牌的同类试剂盒产量更大,纯度更高,最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染,可以直接应用于Northern杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、 cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。

操作步骤

1. 请自行准备:无水乙醇、无RNA酶1.5mL离心管。

2. 取出洗涤液,按以下操作:

a)洗涤液A:21mL加入9mL无水乙醇,混匀;42mL加入18mL无水乙醇,混匀。

b) 洗涤液B:9mL加入21mL无水乙醇,混匀;18mL加入42mL无水乙醇,混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。

取无RNA酶的1.5mL离心管,加入200μL样本,4μLRNA Carrier混合均匀,再加入300μL裂解液及20μL消化液,漩涡震荡10秒,充分混匀,56℃水浴10分钟至完全裂解。

4. [加入1mL无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响RNA的提取与后续实验。

5. 将吸附柱放入收集管内,将760μL上述溶液转入吸附柱内,静置2分钟,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。

6. 将吸附柱放回收集管内,将剩余760μL溶液转移至吸附柱内,重复步骤5。

7. 将吸附柱放回收集管内,加500μL洗涤液A至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。

8.将吸附柱放回收集管内,加500μL洗涤液B至吸附柱内,静置2分钟,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。

9.将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 分钟,离去残留的洗涤液。

10.取出吸附柱,放入新的无RNA酶的1.5 mL离心管内,加入30-50μL洗脱液,静置3 分钟,12,000 rpm 4℃离心2 分钟,收集RNA溶液。

11.70℃保存,或直接用于下一步实验。

注意事项

1. 为防RNA酶污染,实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩,使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水 。

2. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质,请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。

3. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象,置于37℃水浴中溶解即可。

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