ELISA 实验的核心在于 “抗原与抗体的特异性结合” 和 “酶的催化显色反应”，两者协同实现对目标物质的精准检测，具体可分为三个关键环节：

特异性免疫结合

抗原与抗体的结合具有高度专一性，如同 “锁与钥匙” 的专属匹配。例如，当检测样本中的新冠病毒抗原时，只有针对该抗原的抗体能与之结合，其他物质无法干扰。这种特异性是 ELISA 实现精准检测的基础，优品生物在研发试剂盒时，会对每一对抗原抗体进行严格筛选，确保结合的专一性和亲和力，为实验准确性奠定基础。

酶标信号放大

为将免疫结合信号转化为可检测的信号，实验中会引入酶标记抗体（酶标抗体）。酶标抗体既能与抗原 - 抗体复合物特异性结合，又携带具有催化活性的酶（如辣根过氧化物酶 HRP、碱性磷酸酶 AP）。当酶标抗体与复合物结合后，酶便被固定在反应体系中，实现了信号的初步放大。

显色反应与定量分析

向反应体系中加入酶的特异性底物（如 HRP 对应的 TMB 底物），酶会催化底物发生显色反应。底物原本无色，反应后会呈现特定颜色（TMB 在 HRP 催化下显蓝色，加入终止液后变为黄色）。且样本中目标物质的浓度越高，结合的酶标抗体就越多，显色就越深。通过酶标仪测定显色液的吸光度（OD 值），再结合已知浓度的标准品绘制的标准曲线，即可计算出样本中目标物质的浓度，实现定量分析。

二、ELISA 实验完整操作步骤

以优品生物间接法 ELISA 试剂盒为例，完整操作步骤如下，每个步骤都有其关键要点：

1. 实验前准备

试剂准备：取出优品生物 ELISA 试剂盒，检查试剂盒内预包被微孔板、标准品、酶标抗体、底物液、终止液、洗涤液等是否齐全且在有效期内。将所有试剂从冰箱取出，置于室温下平衡 30 分钟，避免温度波动影响反应。

样本处理：对待检测样本（如血清、细胞上清等）进行预处理，离心去除杂质，避免溶血、脂血等情况影响实验结果。同时，根据样本中目标物质的预期浓度，确定是否需要稀释样本。

器材准备：准备好微量移液器（10 - 200μL）、吸头、封板膜、37℃恒温箱、酶标仪等器材，并确保器材清洁、校准合格。

2. 加样操作

取出预包被微孔板，在相应孔中加入标准品、待检测样本和空白对照。标准品需按照试剂盒说明书进行梯度稀释，每孔加入 100μL，每组设置 2 - 3 个复孔以减少实验误差。

加样时，移液器枪头应垂直对准孔底，避免触碰孔壁造成交叉污染，加样后轻轻晃动微孔板，使液体充分混合。

3. 孵育反应

用封板膜密封微孔板，将其放入 37℃恒温箱中孵育 1 - 2 小时（具体时间参照试剂盒说明书）。孵育的目的是让样本中的目标物质与微孔板上的抗体充分结合，孵育期间应避免频繁开启恒温箱，防止温度波动影响反应效率。