凝血块DNA提取中的注意事项

操作步骤 (请自行准备无水乙醇、异丙醇、灭菌 1.5mL 离心管) :

1. 取出洗涤液,按以下操作:

a) 洗涤液 A:21mL 加入 9mL 无水乙醇;42mL 加入 18mL 无水乙醇,混匀。

b) 洗涤液 B:18mL 加入 42mL 无水乙醇;36mL 加入 84mL 无水乙醇,混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在 37℃溶解,摇匀后使用。

2. 取 1.5ml 离心管,放入 5x5x5mm 大小的凝血块,用枪头反复敲打挤压至 1x1x1mm 大小,加入 200 μL 裂解液、3μLDNACarrier 和 40μL消化液,涡旋强烈振荡 30 秒,65℃温育 20 分钟至血凝块完全消解。

3. 加入 450μL 异丙醇,混合均匀,如有半透明悬浮物,不影响 DNA 的提取与后续实验。

4. 将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液;

5. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液 A 至吸附柱内,静置 1 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。

6. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内,静置 1 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。

7. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。

8. 按每份样本 40μL 取洗脱液(如 10 份提取样本,即取 400μL 洗脱液),放置于灭菌 1.5mL 离心管,65℃预热。

9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 离心 2 分钟,离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱,放入新的 1.5 mL 灭菌离心管内,在吸附柱中心加入 40 μL 预热洗脱液,静置 2 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟,收集 DNA溶液。提取的 DNA 即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项:

1. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。

2. 洗涤液在使用前应加入无水乙醇后充分混匀。

©著作权归作者所有,转载或内容合作请联系作者
  • 序言:七十年代末,一起剥皮案震惊了整个滨河市,随后出现的几起案子,更是在滨河造成了极大的恐慌,老刑警刘岩,带你破解...
    沈念sama阅读 216,496评论 6 501
  • 序言:滨河连续发生了三起死亡事件,死亡现场离奇诡异,居然都是意外死亡,警方通过查阅死者的电脑和手机,发现死者居然都...
    沈念sama阅读 92,407评论 3 392
  • 文/潘晓璐 我一进店门,熙熙楼的掌柜王于贵愁眉苦脸地迎上来,“玉大人,你说我怎么就摊上这事。” “怎么了?”我有些...
    开封第一讲书人阅读 162,632评论 0 353
  • 文/不坏的土叔 我叫张陵,是天一观的道长。 经常有香客问我,道长,这世上最难降的妖魔是什么? 我笑而不...
    开封第一讲书人阅读 58,180评论 1 292
  • 正文 为了忘掉前任,我火速办了婚礼,结果婚礼上,老公的妹妹穿的比我还像新娘。我一直安慰自己,他们只是感情好,可当我...
    茶点故事阅读 67,198评论 6 388
  • 文/花漫 我一把揭开白布。 她就那样静静地躺着,像睡着了一般。 火红的嫁衣衬着肌肤如雪。 梳的纹丝不乱的头发上,一...
    开封第一讲书人阅读 51,165评论 1 299
  • 那天,我揣着相机与录音,去河边找鬼。 笑死,一个胖子当着我的面吹牛,可吹牛的内容都是我干的。 我是一名探鬼主播,决...
    沈念sama阅读 40,052评论 3 418
  • 文/苍兰香墨 我猛地睁开眼,长吁一口气:“原来是场噩梦啊……” “哼!你这毒妇竟也来了?” 一声冷哼从身侧响起,我...
    开封第一讲书人阅读 38,910评论 0 274
  • 序言:老挝万荣一对情侣失踪,失踪者是张志新(化名)和其女友刘颖,没想到半个月后,有当地人在树林里发现了一具尸体,经...
    沈念sama阅读 45,324评论 1 310
  • 正文 独居荒郊野岭守林人离奇死亡,尸身上长有42处带血的脓包…… 初始之章·张勋 以下内容为张勋视角 年9月15日...
    茶点故事阅读 37,542评论 2 332
  • 正文 我和宋清朗相恋三年,在试婚纱的时候发现自己被绿了。 大学时的朋友给我发了我未婚夫和他白月光在一起吃饭的照片。...
    茶点故事阅读 39,711评论 1 348
  • 序言:一个原本活蹦乱跳的男人离奇死亡,死状恐怖,灵堂内的尸体忽然破棺而出,到底是诈尸还是另有隐情,我是刑警宁泽,带...
    沈念sama阅读 35,424评论 5 343
  • 正文 年R本政府宣布,位于F岛的核电站,受9级特大地震影响,放射性物质发生泄漏。R本人自食恶果不足惜,却给世界环境...
    茶点故事阅读 41,017评论 3 326
  • 文/蒙蒙 一、第九天 我趴在偏房一处隐蔽的房顶上张望。 院中可真热闹,春花似锦、人声如沸。这庄子的主人今日做“春日...
    开封第一讲书人阅读 31,668评论 0 22
  • 文/苍兰香墨 我抬头看了看天上的太阳。三九已至,却和暖如春,着一层夹袄步出监牢的瞬间,已是汗流浃背。 一阵脚步声响...
    开封第一讲书人阅读 32,823评论 1 269
  • 我被黑心中介骗来泰国打工, 没想到刚下飞机就差点儿被人妖公主榨干…… 1. 我叫王不留,地道东北人。 一个月前我还...
    沈念sama阅读 47,722评论 2 368
  • 正文 我出身青楼,却偏偏与公主长得像,于是被迫代替她去往敌国和亲。 传闻我的和亲对象是个残疾皇子,可洞房花烛夜当晚...
    茶点故事阅读 44,611评论 2 353

推荐阅读更多精彩内容