CAT试验

ER siRNA转染

目前86细胞状态尚可，可用于后期转染试验，48小时前转染细胞，细胞按照50%铺板，24小时后转染，细胞密度约60%，转染后6小时，细胞密度感觉80%，未换液，24小时后直接传代每个6孔板一个孔到新的6cm培养皿，结果48小时后细胞密度仍不到50%。继续培养至明日-72小时，或更长时间提蛋白。

CCK-8以梯度铺板，分别为1/4-1/8-1/16，今日可进行初步测量，12孔板加入180ul无血清培养基和20ul cck-8，培养2小时，每孔分成2*95ul吸取加入96孔板，获得相对基线数据（实际为转染48小时）

平板克隆试验，目前认为day1，预计10-26日开始获得初步结果，拭目以待。

单克隆重新培养

目前CAT与CAT-M的单克隆中，前者状态较好，目前有大量存货，今日继续培养，切记不要过满。

CAT-M始终状态差，现手中有一皿状态较好细胞，一会仔细传代，避免传代比例过高或过低，除非有特殊作用，否则传代按照1:2-1:4，注意保种！

因为CAT-M状态差，现转染ERHP4荧光探针的CAT-M单克隆状态也非常差，不建议继续培养，预计近期CAT-M培养成功后重新铺板，感染病毒。

J-Chain病毒感染单克隆细胞状态极差，现在考虑全部细胞均采用6cm皿感染，先在6孔板生长到80%，传代到6cm皿，贴壁24小时后进行病毒感染，12小时换液，24小时传代到10cm皿。

UC细胞培养及试验

目前培养经验为，15%FBS对于UC细胞较为合适，可以考虑升级到20%FBS进行培养，以增加细胞生长速度和状态。细胞消化时间目前发现try润洗一遍后PBS冲洗，再用Try消化9分钟，仍有20%左右细胞无法从培养皿中消化下来，考虑将细胞消化时间增加为10分钟。

目前细胞已冻存，可充分培养用于试验。BBA与ER的课题需要快速开始，避免消耗太长时间。

动物

目前手中动物给予充分的恢复时间，好生保护，在细胞试验完成后尽快开始功能学试验。

经验

当前设计很多实验同时做，但收效较差，宜保证重要试验如期完成，做好充分规划。在既定时间拿到数据，解决关键问题。今年一定要完成课题并投出文章。

死命令：7点出门，8点回，60天完成任务。