生物素标记是什么？
生物素标记是常用的蛋白标记方法，是指在特定的蛋白或底物上偶联生物素分子，利用生物素和链霉亲和素的高亲和力进行信号放大和检测。
生物素(Biotin B，辅酶A或维生素H)和链霉亲和素发现于20世纪60年代，两者的亲和力可达到10-14M至 10-15M，并且可以在蛋白变性条件下识别并结合，比如1%的十二烷基硫酸钠(SDS)、100mM DTT等条件下。
生物素标记可分为化学方法和生物方法，采用化学方法进行生物素标记缺乏位点特异性，并且可能会导致蛋白失活。生物酶催化生物标记具有高特异性、高效性，是目前常用的生物素标记方法。
BirA是来源于原核生物大肠杆菌的一种生物素连接酶，可以特异性地将生物素共价连接到Avi tag(15个氨基酸GLNDIFEAQKIEWHE)的赖氨酸残基上。动力学实验表明，采用Avi作为底物的反应速度是BirA天然底物BCCP(生物素羧基载体蛋白)的两倍。
图1：生物素标记原理示意图
生物素标记已经在ELISA实验、SPR分子互作检测、BLI分子互作检测、分子生物学、组织化学等方向有广泛应用。
生物素标记的步骤
生物素标记步骤如下：
按照如下反应体系要求，将Avi标签蛋白、缓冲液(UA070015)、BirA(UA070015)混合
*如果Avi标签蛋白浓度介于40~80μM，建议添加Buffer C
2. 混合以上组分后，37℃孵育。在30分钟、60分钟、90分钟时分别取20μl进行分析。(如需要，可取更多时间节点)
3. 采用PullDown或其他生物素定量试剂盒进行分析。
4. 优爱生物测试PullDown结果展示：
10nmol(40μM) Avi-tagged protein substrate were labeled by 2μg BirA at 37℃ for 30min. All sample lanes are loaded 4μg protein, respectively.
Streptavidin has 4 biotin-binding sites, and may associate with 1 to 4 chains of the biotinylated protein. Therefore, the extent of protein biotinylation can be calculated based on the ratio of biotinylated protein to original substrate protein.
Avi标签蛋白生物素标记试剂盒
高效、便捷、高纯度
货号：UA070015
名称：Biotin Labeling for Avitag Protein(Avi标签蛋白生物素标记试剂盒)
规格：200μg、1mg
BirA酶纯度:>95% by SDS-PAGE&HPLC
2μg（N: non-reducing condition, R: reducing condition).
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