学习内容
-怎么区分一二三代测序
-二代测序大体流程
-NGS组学都包括哪些分类(粗略)
-必备名词
flowcell: 测序反应的载体/容器,1个flowcell有8个lane
lane: 测序反应的平行泳道,试剂添加、洗脱等过程的发生位置
tile: 每次荧光扫描的位置,肉眼是看不到的
双端测序: 可能序列比较长有四五百bp,两边各测120-150bp
junction: 双端测序中间一些没有测到的区域
flowcell构造:一个lane包含两列(swath),每一列有60个tile,每个tile会种下不同的cluster,每个tile在一次循环中会拍照4次(每个碱基一次)
-边合成边测序(sequence by synthesis, SBS)~合成
区分一二三代测序
生信星球
二代测序大体流程
1.DNA文库构建
将基因组DNA随机片段化,然后通过末端修复、磷酸化、加A等步骤修补成平末端,最后加上特定的接头(Adaptor),构建成DNA文库。
2.簇的生成——桥式PCR
Flowcel上面连有两种接头(P5、P7),当DNA经变性后流经Flowcell时,利用Flowcell上的接头与DNA两端的接头相互匹配。DNA进行桥式PCR扩增,从而将碱基信号放大。通过桥式PCR不断循环获得上百万条成簇分布的双链待测片段。
3.测序
4.数据产出
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