一、产品概述
由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为兔源抗Rad21多克隆抗体（货号：A300-080A），经抗原亲和纯化制备，以未标记的完整IgG形式提供。该抗体特异性识别人类和鼠源的Rad21蛋白（亦称SCC1，黏连蛋白复合物亚基），适用于免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）应用，是研究有丝分裂、减数分裂染色体分离及DNA损伤修复的关键工具。
二、核心产品参数
参数项目 | 具体规格
靶标蛋白 | Rad21
反应种属 | 小鼠、人
宿主来源 | 兔
克隆类型 | 多克隆
抗体形式 | 完整IgG
免疫原区域 | 第581位至C末端
抗体亚型 | IgG
标记类型 | 未标记
纯化方式 | 抗原亲和纯化
抗原种属 | 人
工作浓度 | 1000 µg/ml（1 mg/ml）
保存温度 | 2 - 8 °C
有效期 | 自收货之日起1年
缓冲体系 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠
三、推荐应用与实验条件
3.1 应用稀释度汇总
应用技术 | 推荐用量/稀释度 | 备注
免疫沉淀（IP） | 6 µg / mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6微克抗体
蛋白质印迹（WB） | 1:10,000 - 1:25,000 | 宽稀释范围，高灵敏度，建议从1:10,000起始
3.2 蛋白质印迹（WB）专用实验条件
通用条件：
封闭液及抗体稀释液：5% 牛奶-TBST
一抗孵育方式：过夜孵育（不可缩短）
细胞裂解物Western Blot：
推荐二抗：山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）
免疫沉淀产物的Western Blot：
推荐二抗：抗兔IgG轻链HRP标记抗体
封闭液补充：需添加5%正常猪血清（货号S100-020）
*重要提示：使用轻链特异性二抗可避免免疫沉淀实验中抗体重链（约55 kDa）的交叉检测干扰，Rad21分子量约为75 kDa，重链信号不直接影响目标位置，但仍建议遵循此标准以获得最佳信噪比。
四、免疫原与表位信息
4.1 免疫原区域
本抗体免疫原对应人Rad21蛋白第581位至C末端之间的区域。依据NP_006256.1（GeneID 5885）的编号体系，人Rad21全长631个氨基酸，因此表位映射在581–631位氨基酸之间（即C末端区域）。
4.2 表位位置
抗体识别的特异性表位位于C末端区域。Rad21蛋白是一种“kleisin”家族成员，其C末端参与与SMC1/SMC3 ATPase结构域的相互作用，对于黏连蛋白环的结构完整性和功能至关重要。该区域也是caspase蛋白酶切割的位点所在（在凋亡信号通路中发生特异性切割）。
五、储存与稳定性
推荐储存条件：2°C至8°C冷藏，切勿冷冻（冷冻会导致蛋白变性及抗体活性丧失）
有效期：自收货之日起1年
缓冲液成分：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂
pH范围：7–8的宽泛pH范围提供了良好的缓冲稳定性
运输建议：冷藏运输，避免反复温度波动
六、主要生物学功能：
1. 姐妹染色单体黏连：在有丝分裂和减数分裂过程中，黏连蛋白复合物环绕姐妹染色单体，将其从DNA复制后到分裂后期前维持在一起，确保正确的染色体分离。
2. DNA双链断裂修复：Rad21通过同源重组途径参与DNA双链断裂的修复。在DNA损伤时，黏连蛋白被募集到断裂位点，将姐妹染色单体拉近以作为修复模板。
3. 凋亡信号转导：Rad21已被证实可被caspase蛋白酶切割。在凋亡信号通路中，caspase介导的Rad21切割触发姐妹染色单体的过早分离，是凋亡程序性细胞死亡的生化标志之一。
七、使用注意事项
1. 叠氮化钠警示：缓冲液含0.09%叠氮化钠，该化合物具毒性，操作时请佩戴手套和护目镜，避免接触皮肤或吸入气溶胶。
2. 高浓度特性：本抗体浓度为1000 µg/ml（1 mg/ml），属于高浓度制剂。进行IP实验时按6 µg/mg裂解物用量吸取少量即可，建议使用低吸附吸头以提高移液准确性。
3. IP用量计算：推荐用量为6 µg抗体/mg总蛋白裂解物。示例：若细胞裂解物总蛋白为2 mg，则需加入12 µg抗体（即12 µl，因浓度为1 µg/µl）。
4. 二抗选择：
检测细胞裂解物WB时，可使用识别重链和轻链的二抗（如A120-101P）
检测IP产物WB时，建议使用抗兔IgG轻链HRP标记抗体，并添加5%正常猪血清以降低非特异性背景。虽然Rad21分子量（约75 kDa）与抗体重链（约55 kDa）位置不同，使用轻链特异性二抗仍可消除任何潜在的重链干扰，并提高实验结果的专业性。
5. 过夜孵育要求：WB实验中一抗需过夜孵育（建议4°C缓慢摇动），请勿缩短至室温1–2小时，否则可能显著降低检测灵敏度，特别是在检测低丰度Rad21或切割片段时。
6. 反应种属确认：本经验证可识别人和小鼠Rad21。对于大鼠等其他物种，建议通过序列比对评估交叉反应可能性，并进行预实验验证。
7. Caspase切割产物的检测：由于本抗体识别的表位位于C末端（581–631位氨基酸），而caspase切割位点位于C末端区域附近，因此该抗体可能无法检测被切割后释放的C末端小片段，但可识别保留完整C末端的全长Rad21及N末端切割产物。设计凋亡实验时请注意此特性。
*本说明书基于产品特性研究编写，使用者应结合具体实验体系进行优化验证。
