如何选择RNAi转染试剂

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来生命科学领域最为重大的发现之一。它是指小分子双链RNA可以特异性地降解同源mRNA,从而抑制或关闭特定基因表达的现象。人们只要知道了某种疾病的致病基因,就可以设计出针对该基因mRNA的小分子干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA),抑制或封闭该致病基因的表达,从而达到治疗疾病的目的。RNAi是目前最为热门的生命科学研究领域,RNAi转染是目前最为常见的基因功能研究实验之一。

实施RNAi,将siRNA导入细胞有多种方法,包括化学转染法、电穿孔法、磷酸钙共沉淀法、显微注射法等。其中,化学转染法是目前最为常用的方法,由于电转的方法对细胞损伤比较大,一般不建议选择电转。化学转染能否成功的关键在于选择RNAi转染试剂,市场上现在有多种声称可以转染siRNA的试剂,但真正转染性能较好、比较知名的产品就那么几个,包括RNAiMAX、 RFect小核酸转染试剂、Lipo2000、Lipo3000等。在选择siRNA转染试剂时,特别需要关注的是siRNA的劣效转染。所谓siRNA的劣效转染是指,转染试剂虽然可以把荧光标记的siRNA (FAM-siRNA、CY3-siRNA、CY5-siRNA等)转染入细胞,但RNAi效果却很差,甚至几乎没有。劣效转染常见于一些阳离子聚合物(主要为PEI)和阳性脂质体类siRNA转染试剂,其出现的根本原因在于,阳离子聚合物和阳性脂质体可以与siRNA紧密结合,能够将其转染入细胞,但在进入细胞后,siRNA却无法有效释放,因而在荧光显微镜下虽然可以看见较强的FAM-siRNA荧光,但RNAi的效果却很差,RT-qPCR检测,目的mRNA并没有得到有效的敲降。在一些声称可以做siRNA转染的国内试剂中,劣效转染尤为常见。

具体说到RNAi转染试剂,笔者的建议是,对于一些经费特别充足的研究者,可以选择RNAiMAX,mRNA敲降效果明显,品牌也足够权威。对于大多数经费不是特别充足的研究者来说,RFect小核酸转染试剂是个不错的选择。mRNA敲降效果与RNAiMAX相当,同样量的siRNA,RNAi效果甚至超过了RNAiMAX,不足之处为品牌不够强大,号召力有待提升。其它如Lipo2000、Lipo3000,也很不错,但mRNA敲降效果不如RNAiMAX和RFect。

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