在基因工程小鼠模型中，Cre工具鼠（携带Cre重组酶基因）繁育纯合子代（Cre/Cre）通常存在风险，且强烈建议避免。主要原因如下：
1. 胚胎致死或发育异常：
基因剂量效应： Cre重组酶在纯合子中的表达量通常是杂合子的两倍。过高的Cre表达水平可能：
毒性： Cre重组酶本身在高浓度下可能对细胞产生毒性，干扰正常的细胞过程，导致胚胎发育停滞或死亡。
非特异性切割： Cre酶识别特定的loxP位点，但在浓度过高时，可能会识别并切割与loxP序列相似的“伪位点”，造成非预期的基因组损伤和突变，破坏必需基因，引发致死或严重畸形。
过早/过强的重组： 即使没有毒性或脱靶效应，过早（在胚胎发育极早期）或过强（在非目标组织）的重组也可能删除对胚胎发育至关重要的基因，导致胚胎无法正常发育。
2. 健康问题与生存力下降：
即使纯合子小鼠能够出生，它们也常常表现出：
· 体质虚弱、生长迟缓、体型较小。
· 生育能力下降或不育： 过高的Cre表达可能损害生殖腺（卵巢或睾丸）的功能。
· 神经系统异常或行为异常： 如果Cre在神经系统中表达或渗漏表达，高剂量的Cre可能导致神经发育或功能问题。
· 总体健康状况不佳、寿命缩短、对压力或疾病更敏感。
这些问题使得纯合子小鼠不适合作为种鼠或进行长期实验。
3. 实验干扰：
· 非特异性表型： 纯合子小鼠表现出的健康问题或发育异常可能完全是由于Cre过表达本身引起，而不是由后续与floxed小鼠交配后产生的条件性基因敲除引起的。这会严重干扰实验结果的解读，混淆真正的基因功能表型。
· 无法获得合适的对照组： 在后续与floxed小鼠交配产生的实验组（通常是Cre/+; flox/flox或Cre/+; flox/+）中，很难找到基因型匹配且健康的纯合Cre对照组（Cre/Cre; +/+或Cre/Cre; flox/+），因为后者本身就可能不健康。而使用杂合Cre（Cre/+）作为对照又不完全匹配（Cre剂量不同）。
4. Cre表达的组织特异性可能改变：
· 常规做法： 强烈建议仅使用Cre杂合子（Cre/+）小鼠进行繁育和实验。 这是绝大多数Cre品系的标准操作。
· 避免纯合繁育： 不应将两只Cre小鼠（即使是杂合子）互交来试图获得纯合子，因为后代中会有1/4的概率是Cre纯合子，而这些纯合子很可能无法存活或存在严重问题。
· 维持品系： Cre工具鼠品系通常通过与野生型小鼠（+/+）交配来维持和扩繁，后代中约50%是杂合子（Cre/+），50%是野生型（+/+）。杂合子用于后续与floxed小鼠交配产生实验动物。
· 查阅品系信息： 在获取或使用一个特定的Cre品系时，务必查阅原始文献或供应商（如JAX, MMRRC）提供的详细品系说明。 供应商通常会明确标注该品系在纯合状态下是否可存活、是否有已知的健康问题或胚胎致死性。
· 验证与监控： 即使某个Cre品系声称纯合子可育或健康，在首次使用时也应进行小规模繁育测试，并密切监控纯合子后代的生存率、健康状况、生育能力等。
例外情况（罕见且需谨慎）：
极少数经过特殊设计或筛选的Cre品系（例如某些CreERT2品系或表达水平极低的品系）可能在纯合状态下是可存活的，但这绝对不是普遍情况。即使如此，也需要严格的文献支持和实验验证，并且仍然需要高度关注Cre高表达可能带来的潜在影响。
结论：
为了确保实验动物的健康、实验结果的可靠性以及遵守动物福利原则，应避免繁育Cre小鼠的纯合子代（Cre/Cre）。标准的操作是使用并维持Cre杂合子（Cre/+）状态。 在实验设计时，务必参考特定Cre品系的官方说明或文献，了解其在纯合状态下的特性。
