最近在做细胞的油红O染色。得益于微信公众平台的许多资料，尤其是被油红O染色折腾的我这篇文章，使我这种手残人士容易出现的低级错误减少了不少。鉴于我这种瞎胡乱尝试的性格，实验仍是失败了一二三四五次等，不过也确实收获到了不一样的技巧。在此记录下来，也算是一种实验中的一些趣味。
首先需要了解油红O染色原理，在此就直接借用索莱宝的油红O染色试剂盒的说明书说法：
油红O是很强的脂溶剂和染脂剂，较易与甘油三脂结合呈小脂滴状，与磷脂结合力稍差，其染色原理一般认为是物理上的溶液作用或吸附作用，借溶液作用使脂肪染色。染料在细胞内脂质的溶解度较原溶剂中的溶解度更大，所以在染色时染料就从有机溶剂转移入脂质而使脂肪染色。
然后附上实验步骤：
1）试剂准备：
油红O母液：1g油红O粉末溶解在100 mL异丙醇中(异丙醇易挥发，注意密闭避光，常温放置即可)。充分溶解之后仍会出现很多沉淀。
油红O工作液：油红O母液（静置后的上清）与双蒸水3:2稀释，2000 rpm离心5 min，可以吸出上清备用，或者直接用，但是要注意不要吸到液体最底部，避免吸入沉渣。
60%异丙醇：异丙醇与双蒸水3:2稀释。
苏木素染色液：使用前2000 rpm离心5-10 min。
2）4% PFA 固定细胞10 min，PBS漂洗2-3次；
3）60%异丙醇浸润15-30 s（目的是使细胞表面被有机溶剂覆盖，使染料更好的进入细胞着色）；
4）油红O工作液染色30 min（保鲜膜包裹避免挥发，同时注意避光），60%异丙醇浸润15-30s（浸润时间没有摸索，所以不清楚浸润多久时间会脱色）；
5）自来水冲洗；
6）苏木素染色 0.5 - 1 min（苏木素染色后会增加对比度，同时油红O的颜色也会更亮），自来水冲洗；
7）拍照。
此外我还尝试过把细胞铺在爬片上染色，贴壁72小时后染色，细胞基本都飘走了，有可能是细胞密度过大，但也有一部分原因是脂滴过多的细胞本身贴附就不太牢固，容易飘起来。所以也放弃了细胞爬片。
按照这个步骤做一般没问题。
