TGIRT-III RTnase具有依赖于DNA/RNA杂交链的反转录酶活性，其具有极强的延伸性能，因此更易快速获得全长的cDNA能快速合成cDNA，该酶具有强的链转换活性（Switch）。因此，该酶可用于Template-Switching的RNA-seq，如tRNA、ncRNA、miRNA等核酸分子的同步逆转录和加接头（TGIRT template-switching reaction，用于TGIRT-Seq）。除此外，其还可以利用RNA的5’端帽结构进行SMART建库（SMART-Seq）。该酶的反应温度为37-55°C，最佳反应温度为50°C。
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反应实例：
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