细胞侵袭/转移结果处理

直接计数法

“贴壁”细胞计数:这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后,可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去。可以通过给细胞染色,可在镜下计数细胞

*   用棉签擦去基质胶和上室内的细胞;

*   染色:常用的染色方法有结晶紫染色、台靡蓝染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色等。

*   细胞计数:使用正置显微镜进行观察和拍照,把Transwell小室反过来底朝上就可清楚看到小室底膜上下室侧附着的细胞。也有不少人用手术刀将膜切下后染色,再贴在玻片上,滴二甲苯,再盖上盖玻片,就可以长期保存,但是这样做小室就成了一次性的了,未免有点浪费。(取若干个视野计数细胞个数。一般采用3-5个视野,也有人用10个,都是随机选取。)
  • 间接计数法

    由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系,有时细胞在穿过膜后不能附着在膜上,而是掉进下室。 间接计数法主要用于穿过细胞过多,而无法通过计数获得准确的细胞数所采用的方法,与常用的MTT实验是同样的原理。

      1. MTT法
      • 用棉签擦去基质胶和上室内的细胞;

      • 24孔板中加入500µl含0.5mg/ml MTT的完全培养基,将 小室置于其中,使膜浸没在培养基中,37℃ 4h后取出。

      • 24孔板中加入500µl DMSO,将小室置于其中,使膜浸没在DMSO中,振荡10min,使甲湃充分溶解。取出小室,24孔板于酶标仪上测OD值。

      1. 荧光试剂检测 这类方法一般是与Transwell小室一起出售的,其原理与MTT法类似,是用一种荧光染料染细胞,再将细胞裂解,检测荧光值。Chemicon的ECM554即属于这类。
      1. 结晶紫检测 上文已说过,这里不再赘述,原理与MTT法也是类似的。但结晶紫染色还有个优点,就是染色和脱色的过程并不影响膜上细胞,在脱色后还可重新染色。

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