产品概述
p300（亦称EP300或组蛋白乙酰转移酶p300）是一种多功能转录共激活因子，具有组蛋白乙酰转移酶（HAT）活性，在染色质重塑和基因转录调控中发挥核心作用。本文介绍的由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗p300抗体亲和纯化，货号A300-358A是一款兔源多克隆抗体，特异性识别p300蛋白，适用于染色质免疫沉淀（ChIP）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）等应用。
基本规格
抗体类型：兔多克隆IgG，完整IgG形式，未偶联。
免疫原：对应人p300蛋白（E1A相关蛋白p300）第950至1000位氨基酸残基区间，参考序列NP_001420.2（GeneID 2033）。
纯化方式：抗原亲和纯化——将特异性表位固定于固相载体，富集高特异性抗体。
浓度：1000 µg/ml（测定方法：比尔定律，1 mg/mL IgG在A280nm处吸光度为1.4）。
缓冲体系：Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。
储存与稳定性：2-8°C保存，自收货之日起稳定期1年。
产地：美国。
反应种属与特异性
已验证反应种属：人（Human）。抗体识别表位位于p300蛋白第950-1000区域。需注意p300与CBP（CREB结合蛋白）具有序列同源性，建议用户根据实验需求验证交叉反应性。
推荐应用与实验条件
1. 免疫印迹（Western Blot，WB）
推荐稀释比：1:10,000 至 1:25,000
凝胶建议：推荐使用3-8% Tris-醋酸酯凝胶，以有效分离分子量约300 kDa的p300蛋白。
通用WB操作要点：
封闭液和抗体稀释液：5%脱脂牛奶-TBST
一抗孵育：过夜（O/N）
二抗选择：
细胞裂解液样本：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体（如A120-101P）
免疫沉淀后样本：需使用HRP标记的抗兔IgG轻链特异性二抗，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（如S100-020），以避免重链干扰
2. 免疫沉淀（IP）
用量：每毫克细胞裂解液蛋白使用6 µg抗体
适用样本：人源细胞或组织裂解液
3. 染色质免疫沉淀（ChIP）
推荐用量：10 µg / 反应
参考方法：参考Ram O et al., Cell 2011 Dec 23;147(7):1628-39。此前批次的抗体已验证可用于ChIP-seq实验。
注意：ChIP实验需根据特定样本和实验体系优化交联、染色质片段化及抗体用量。建议设置阳性和阴性对照。
p300的生物学功能
p300（UniProt ID: Q09472）是一种组蛋白乙酰转移酶，也称为KAT3B。其功能包括：
组蛋白乙酰化：催化组蛋白乙酰化，松弛染色质结构，促进转录因子结合。
多种酰基转移酶活性：除乙酰化外，还具有组蛋白丁酰化、巴豆酰化、丙酰化等修饰功能。
转录共激活：结合磷酸化CREB，介导cAMP调控的基因表达；同时也是HIF1A（缺氧诱导因子1α）的共激活因子。
与病毒蛋白相互作用：通过结合E1A蛋白参与细胞转化过程。
p300与CBP（CREB结合蛋白）高度同源，两者在多种细胞过程中功能重叠但亦有差异。
