使用比色法检测指标的时候,有的老师会遇到样本用量太大、样本值无法测出、操作繁琐、用时太长等困扰。此种情况下,不妨试试荧光法试剂盒,能显著提升实验效率。
表一:荧光法检测与比色法检测对比
荧光法试剂盒检测原理
具有特定结构的物质在吸收特定波长的能量后,其分子跃迁至激发态。从激发态回到基态的过程中,会以光的形式释放部分能量,形成荧光。
在一定浓度范围内,物质产生荧光的强度(F)与物质浓度(C)成正比,即F = kC。因此,可以通过检测仪器测定荧光强度,从而计算物质的浓度。
荧光法测试盒特点
01 灵敏度更高,样本用量少
荧光法测试盒的灵敏度,通常较比色法高出2〜4个数量级,而所需样本用量一般少于比色法检测所需用量。如组织游离脂肪酸的测定,使用比色法需要500μL样本,而荧光法测定仅需0.125μL。对于无法富集或难以获取的样本,荧光法测试盒能满足更多实验需求。
表二:同一指标用比色法和荧光法检测的灵敏度对比
02 特异性更强
荧光法测试盒采用“酶+荧光探针”的检测原理,使荧光法检测选择性更高,特异性更强。
03 操作更简单
相较于比色法,荧光法测试盒的试剂组成更简单,检测速度更快,样本适用性更广,能大幅减少实验时间和工作量。
表三:ATP含量测试盒对比
产品应用
荧光法测试盒在众多研究领域有着广泛应用。例如,2021年,南京大学医学院研究团队在Frontiers in Pharmacology发表文章,揭示了SOAT1蛋白在胃癌发展和淋巴结转移中的作用,及Avasimibe在胃癌治疗过程中的抗肿瘤效果。
研究过程中,研究人员使用了荧光法测试盒,对细胞样本的总胆固醇和胆固醇酯含量进行了检测,得到结果如下图[1]:
表四:Elabscience®荧光法试剂盒产品
●参考文献●
[1]Zhu T, Wang Z, Zou T, et al. SOTA1 promotes gastric cancer lymph node metastasis through lipid synthesis. Frontiers in Pharmacology, 2021, 12: 769647.