唾液RNA提取注意事项

产品特点

◎提取RNA纯度高,无抑制剂,A260/A280为1.8-2.0;

◎产率高,同样的样本量提取的RNA更多;

◎可用于唾液样本中RNA的提取,提取后的RNA可用于核酸检测使用;

◎可用于中量(0.5-1.5mL)唾液样本中RNA的提取;

◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂,安全无毒。

产品介绍

BIOG RNA Saliva Kit是常州百代生物科技有限公司研制的专门用于提取中量(0.5-1.5mL)唾液的RNA的试剂盒。BIOG RNA Saliva Kit采用了最新的优质进口离子膜,裂解液和洗脱液经过多次优化,能高效地分离RNA。提取得到的RNA较其它品牌的同类试剂盒产量更大,纯度更高,最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染,可以直接应用于Northern 杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、 cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。

操作步骤

1. 请自行准备:无水乙醇、无RNA酶15 mL离心管、无RNA酶20 mL离心管。

2. 取出析出液和洗涤液,按以下操作:

a) 洗涤液A:22.4mL加入9.6mL无水乙醇,混匀;44.8mL加入19.2mL无水乙醇,混匀。

b) 洗涤液B:9.6mL加入22.4mL无水乙醇,混匀;19.2mL加入22.4mL无水乙醇,混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。

3. 取1.5mL唾液至20ml离心管中,加入20μL RNA Carrier混合均匀,加入1.5ml 裂解液及100μL 消化液,振荡混匀,56℃水浴10 分钟。

4. 加入6mL无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响RNA的提取与后续实验。

5. 将吸附柱放入收集管内,将4560μL上述溶液转入吸附柱内,静置2 分钟,5,000 rpm 4℃离心2 分钟,弃收集管内废液;

6. 将吸附柱放回收集管内,将剩余4560μL溶液转移至吸附柱内,重复步骤5。

7. 将吸附柱放回收集管内,加2500μL 洗涤液A至吸附柱内,5,000 rpm 4℃离心2 分钟,弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内,加2500μL 洗涤液B至吸附柱内,静置2分钟,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。

9. 将吸附柱放回收集管内,5,000 rpm 4℃离心2 min,离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱,放入新的15 mL离心管内,加入150-300 μL 洗脱液,静置3 min,5,000 rpm 4℃ 离心3 min,收集RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步实验或-70℃保存。

注意事项:

1.由于RNA容易降解,提取实验所用器具应除去RNA酶,实验过程中最好戴一次性洁净手套、口罩,提取的RNA溶液可适当加入RNA保护因子(货号:51090,一般50μLRNA溶液加入2μL。)

2.裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。

3. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象,置于37℃水浴中溶解即可。


©著作权归作者所有,转载或内容合作请联系作者
平台声明:文章内容(如有图片或视频亦包括在内)由作者上传并发布,文章内容仅代表作者本人观点,简书系信息发布平台,仅提供信息存储服务。

推荐阅读更多精彩内容