酶联免疫吸附测定enzyme linked immunos orbent assay（简写ELISA）是指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。
ELISA的基本原理是：1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；2.是抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性；3.在测定时，把受检标本（测定其中的抗原或抗体）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应；4.用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的酶量和标本中受检物质的量成一定比例；5.加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量和受检物质的量成一定的比例，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。
ELISA目前分为三种方法学：
夹心法
夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤是将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体；
加入待测检体，若检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，然后洗去多余待测检体；
洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结；
洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。
间接法
间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为：
将已知的抗原故著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗原；
加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶盘上的抗原进行专一性键结；
洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结；
洗去多余未键结的二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。
竞争法
竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：
将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体；
加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结；
加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此，当检体中的抗原量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆可竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法的由来；
洗去检体带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留有酶的抗原越少，显色也就越浅。
当需要侦查无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。
定性测定的结果判读是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出有或无的简单回答，分别用阳性、阴性表示。
阳性表示该标本在该测定系统中有反应，阴性则无反应。
用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。
在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具有定量意义。
在间接法和夹心法ELISA中，阳性孔呈色深于阴性孔。
在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。
