热启动Taq酶试剂的比较

热启动Taq酶由于能够很好的解决PCR中常出现的非特异性扩增、引物二聚体形成等问题，同时有效提高了目标基因的扩增成功率及产率，因而一直以来都备受科研人员的青睐。而一种扩增效率高、酶动力强、灵敏度高的热启动Taq酶对后续的实验更是能起到积极的作用。

目前，国内市场上销售的热启动Taq酶的品牌很多，但真正高质量的热启动Taq酶并不多，国外品牌有ABI、Bioline等，国内品牌有Starvio、Probegene等。面对各品牌的热启动Taq酶，怎么选是关键。

选择高扩增效率的热启动Taq酶对PCR、qPCR能否成功很重要。我们实验室对国内常用品牌的热启动Taq酶曾经进行过比较，将人RNase的一个片段质粒5倍梯度稀释，将qPCR结果做成标准曲线，结果ABI和Starvio热启动Taq酶扩增效率都在95%以上，每反应体积能够检测的最低量可达2pg（如图1），而某国际知名品牌T的热启动Taq酶的扩增效率只有90%，在模板量为2pg时无扩增曲线。

图1. StarvioHC热启动Taq酶扩增人RNase的一个片段。以1ng人基因组DNA为模板，5倍系列稀释。可见，StarvioHC热启动Taq酶具有较高的反应灵敏度（1.6pg），重复性好，线性范围宽。

除了以高扩增效率为热启动Taq酶的选择标准外，对于酶动力强这一点，我们也曾比较过多家公司的热启动Taq酶。在国外品牌中，英国Bioline公司的热启动Taq酶（lmmulase）酶动力较好，可做4重PCR，等量起始模板CT30时的荧光信号值最高。在国内品牌中，Starvio热启动Taq酶的指数期较长，可支持4重以内的PCR检测反应、目扩增曲线的“S”型不受影响（图2）。其它的国产品牌一般只能支持2重反应，在做3重反应时，扩增曲线低矮，荧光信号值较低，无典型扩增曲线，结果很难判定。

图2. 使用StarvioHC热启动Taq酶检测呼吸道病原体感染。1为内参基因扩增曲线，2为肺炎支原体扩增曲线，3为呼吸道合胞病毒扩增曲线，CT值分别为25.2、26.6、28.8。以上可见，StarvioHC热启动Taq酶具有扩增曲线典型，酶动力强劲，适合多重检测等显著优点。

此外，灵敏度也是我们在选择热启动Taq酶需要着衡量的标准。有些样本中目标基因的丰度很低，非常考验热启动Taq酶的检测灵敏度，灵敏度高了，实验数据自然更加真实可靠。我们将Starvio热启动Taq酶与T品牌的热启动Taq酶进行对比（如图3）：同一份呼吸道拭子样本，用Taqman探针法检测肺炎支原体， Starvio热启动Taq酶比T品牌的热启动DNA聚合酶检测结果早2个CT。可见，Starvio热启动Taq酶拥有超高的灵敏度，较部分同类化学封闭的热启动DNA聚合酶相比，更适合用于低丰度样本的检测。

图3. 同一份呼吸道拭子样本，Taqman探针法检测肺炎支原体， StarvioHC热启动Taq酶（1）比知名品牌供应商T热启动DNA聚合酶（2）检测结果早2个CT。

总的来说，目前国内市场上比较知名的国外品牌如ABl、Bioline等公司的热启动Taq酶性能较好，国产热启动Taq酶中，Starvio热启动Taq酶的扩增性能不错，与国外名牌产品无明显差异，其它很多国产品牌的扩增性能不够理想，研究者需根据自己的实验要求和经费情况进行选择，最好做一个梯度稀释扩增实验，以检测热启动Taq酶的扩增效率和灵敏度。