Identification of senescence-associated circular RNAs(SAC-RNAs) reveals senescence suppressorCircPVT1

CircPVT1抑制细胞衰老

文献影响因子：10

细胞衰老是一种由细胞在刺激下引起的生长抑制的状态，衰老的细胞在人生理和病理学上有不同的影响，有些衰老的影响是有益的，如癌细胞的衰老。本文研究的是circRNA对细胞衰老的作用机制。

一、circRNA调控机制

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在正常状态下，PVT1基因的初始转录本中的一个外显子环化形成circPVT1，这种环状RNA作为microRNA Let-7的海绵吸附体吸附Let-7；Let-7是与靶标mRNA的3’-UTR结合抑制蛋白表达的一类microRNA，当Let-7被circPVT1结合吸附时，其靶标Mrna顺利翻译表达蛋白使细胞得以正常生长。当细胞受到某种刺激时，circPVT1表达降低，从而使Let-7水平上升抑制靶标mRNA翻译，细胞衰老。

二、核心实验和结果

1、作者首先通过分别对正常生长和衰老的WI-38纤维母细胞进行高通量的RNA测序筛选出差异表达的circRNA，在筛选出的circRNA中作者重点关注circPVT1。circPVT1是由PVT1基因的一个外显子环化形成，其在衰老的纤维母细胞的表达量异常降低。

而在检测生长细胞和衰老细胞的TP53和P21时发现这两者表达是升高的。然后作者通过构建circPVT1的敲低细胞株检测TP53和P21的表达以及细胞衰老的检测说明circPVT1敲低导致TP53和P21的表达升高和细胞衰老。

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图A为分别用q-pcr和WB检测生长细胞和衰老细胞的TP53和P21的表达；图B为circPVT1敲低后用WB检测TP53的表达；图C为SA-βgal染色检测细胞衰老。

2、随后作者通过设计circPVT1特异的反向互补探针钓取circPVT1以及与circPVT1结合的microRNA筛选出与circPVT1特异结合的microRNA Let-7，然后通过荧光素酶实验验证circPVT1与Let-7的结合关系，再通过对circPVT1敲低后检测Let-7靶标的表达说明circPVT1通过结合Let-7促进下游靶标的表达。

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图A是用circPVT1特异互补探针钓取circPVT1以及与之结合的microRNA；图B是荧光素酶实验验证circPVT1与Let-7的结合；图C是circPVT1敲低后检测Let-7靶标的表达。

3、作者最后通过对circPVT1敲低和添加Let-7的互补序列检测TP53和P21的表达，并通过SA-βgal染色检测细胞衰老，说明circPVT1对细胞衰老的抑制作用。

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图A为circPVT1敲低和添加Let-7的互补序列后进行q-pcr检测P21mRNA的表达；图B是WB检测P21和TP53蛋白的表达；图C是SA-βgal染色检测细胞衰老；图D是检测生殖细胞和衰老细胞中Let-7含量的检测。

参考文献：Amaresh C. Panda,Ioannis Grammatikakis,Kyoung Mi Kim,et al. Identificationof senescence-associated circular RNAs(SAC-RNAs) reveals senescence suppressorCircPVT1[J]. Nucleic Acids Research, 2016, 10.1093