新技能get,手把手教你如何利用miRNA发2到3分的文章

近年来,miRNA引起了越来越多研究人员的注意,其在生物发育、细胞分化和疾病发生等各种生物学过程中起着非常重要的作用,今天,小编就来教大家如何利用miRNA发2到3分的文章,下面举一个例子来说明:

我们来分析一下作者都做了什么首先作者提出观点,microRNA 342已被发现在多种类型的癌症中起重要作用,但是在鼻咽癌中,目前还没有关于microRNA 342分子及其作用机制的研究,因此,本研究旨在检测miR-342在鼻咽癌中的表达,探讨miR-342在鼻咽癌发生发展中的作用,并探讨其可能的分子机制。

然后看作者的研究思路和方法是什么

研究人员从临床病例中获得52例病变组织和11例正常组织标本用于临床实验,根据肿瘤转移发展时期不同进行分类,另外从美国ATCC机构购买了NPC SUNE1, 5-8F and 293T三个细胞系,对细胞系进行培养以及转染,转染48 h后,用逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR 342表达。转染后24和48 h进行MTT和Transwell侵袭试验。转染后72小时进行Western印迹分析。此外,作者还采用了生物信息学方法对miR342的靶点基因进行了分析。最后进行数据统计分析。

结果

用RT-qPCR的方法检测出人鼻咽癌组织和正常鼻咽上皮标本中miR-342的表达水平:鼻咽癌组织中mir 342的表达明显低于正常鼻咽上皮组织(P<0.05)。此外,还检测了鼻咽癌细胞株SUNE1和5-8F细胞和正常鼻咽上皮NP65细胞中miR 342的表达水平:

miR342低表达与肿瘤不同的发展时期有显著相关性,而与性别或年龄无关。


用miR 342模拟物或NC转染SUNE1细胞48 h后,RT-qPCR检测结果显示,miR 342基因转染的SUNE1细胞中miR342的水平明显升高,MTT实验结果显示miR342的异位表达抑制了SUNE1细胞的增殖,MIR 342模拟物转染SUNE1细胞后,与NC转染细胞相比,细胞浸润明显减少。

此外研究人员在细胞实验中采用了荧光素酶报告基因实验来证实了ZEB1是鼻咽癌中miR 342的直接靶点,在临床鼻咽癌组织和正常鼻咽上皮标本中也检测到了ZEB1的表达。

随后,研究人员又通过ZEB1基因敲除实验证实miR342是通过抑制靶基因ZEB1抑制鼻咽癌细胞增殖和侵袭。 

文章分析完了,我们来总结一下作者的研究思路:作者首先提出一个已知的对其他癌症有抑制作用的miR342分子可能也会对鼻咽癌的发生发展起重要的抑制作用,然后进行一系列的常规实验对该假设进行验证,除了细胞实验外作者还设计了临床实验来增进实验结果的可信度、准确性和实用性,另外作者对miR342的直接靶基因也进行了假设,之后用实验验证假设的结果,一篇文章就这样完成了。

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