根癌农杆菌介导转化的原理(Agrobacterium tumefaciens)

19世纪末Smith首次发现根癌农杆菌 (A. tumefaciens),它是一种革兰氏阴性土壤杆菌,其上含有 Ti 质粒,质粒上有一段 T-DNA。当双子叶植物的细胞受伤时会释放大量酚类化合物,在酚类物质的诱导下,农杆菌会吸附在植物受伤处,T-DNA 片段这时就会转移并整合到受体物的基因组中。农杆菌的成功转化需要 Ti 质粒上的 T-DNA 及 Vir 区,它们都是不可或缺的。在T-DNA 区左右两端是两个 25 bp 的正向重复序列,分别为左边界LB和右边界RB。Vir 区的基因能激活 T-DNA 的,转移。在自然条件下,根癌农杆菌只感染双子叶植物,但经过人工诱导(培养中添加乙酰丁香酮 AS),农杆菌也可介导单子叶植物,真菌等。T-DNA 转移整合进受体基因组中有两种方式,一种是同源重组,利用片段间的同源性定向置换掉目的基因,是进行基因功能研究的重要方法。而另一种方式是异常重组,即 T-DNA 的整合插入是随机无规则的。

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