腺相关病毒（AAV，Adeno-associated virus）

AAV 属于细小病毒，无包膜，单链 DNA，不整合宿主基因组（极低概率随机整合）

包装容量：上限约 4.7 kb，是最大短板，长片段很难塞进去。

表达特点：表达启动偏慢，一般 7–14 天起表达；在非分裂细胞（神经元、心肌、视网膜）可实现数月至长期稳定表达。

免疫原性：很低，动物体内使用炎症反应弱；不同血清型（AAV2、AAV9、AAV-DJ 等）具备组织靶向性，脑、肝脏、肌肉常用。

局限：装载容量小；分裂旺盛的细胞中，游离的病毒 DNA 会随细胞传代丢失，体外细胞实验不推荐。

适用：体内动物实验首选，神经科学、心肌、肝脏、视网膜等组织长期基因递送；临床前基因治疗研究。

腺病毒（Ad，Adenovirus）

无包膜双链 DNA 病毒，不整合基因组，以游离形式存在细胞核。

包装容量：最大可包装约 7.5 kb 外源片段，装载能力优于 AAV 和慢病毒。

表达特点：起效快，1–2 天即可高表达；瞬时表达，一般维持 2～3 周，细胞分裂后表达快速下降。

免疫原性：强，免疫健全小鼠体内容易触发免疫清除，不适合长期体内研究；但转导效率极高，很多难转染原代细胞也能高效感染。

局限：免疫反应强，体内长期实验受限；不能构建稳定细胞株。

适用：需要短期强表达的体外细胞实验；原代细胞过表达；疫苗开发；短期动物模型（急性实验）；大片段基因递送。

慢病毒（LV，Lentivirus）

有包膜 RNA 病毒，逆转录后整合到宿主基因组，是核心特征。

包装容量：约 8–9 kb。

表达特点：感染后 2–4 天开始表达；基因组整合，细胞传代后持续稳定表达，可以构建稳定细胞株。

免疫原性：体外细胞实验免疫反应低；体内注射时扩散能力弱，体内长期实验不如 AAV。

风险：存在插入突变风险，随机整合，有激活原癌基因隐患；生物安全等级要求更高（大多实验室需要 BSL-2）。

适用：体外构建稳定细胞系（过表达、shRNA 敲低、CRISPR 敲除）；干细胞、原代细胞体外改造；ex vivo 细胞改造（如 CAR-T 相关体外修饰）；局部体内实验（脑区局部注射）。

关于三种病毒载体的选择，可以按下述 4 个问题快速决策：

1、实验是体外细胞还是体内动物？

体外稳转 → 慢病毒；体外短期高表达 → 腺病毒；体外分裂细胞不要优先 AAV

体内长期观察 → AAV；体内急性短期实验，大片段 → 腺病毒

2、目的基因 + 启动子 + 元件总长度多大？

超过 4.7 kb，直接排除 AAV；超过 7.5 kb，腺病毒也无法包装

3、你需要瞬时表达还是永久稳定表达？

永久稳定（细胞传代不掉）→ 慢病毒；只看 2 周内效果 → 腺病毒；动物数月观察 → AAV

4、动物模型免疫背景？

免疫健全小鼠，尽量避开腺病毒（容易被免疫清除，表达很快掉下去）