免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫荧光是生物学中经常用到的三种应用，他们的英文名分别是Immunohistochemistry (IHC)，Immunocytochemistry (ICC) 和Immunofluorescence (IF)。对于实验室新手来说可能是很容易搞混的，即便是技术大拿们可能在写英文文献的时候也会不小心用错，因为这三个应用确实有些相似，那么下面就随小编一起来看一下他们到底区别在哪里吧。

词根意义：

Immuno-指的是免疫技术 （例如，抗体和抗原的结合）

Histo-指的是组织（细胞以及它周围的细胞外基质）

Cyto-指的是细胞（不包含细胞外的基质）

Chemistry-在这里指的是化学检测方法（例如，颜色的变化）

Fluorescence-对被激发的荧光团的检测

      对于这三个应用，有一个部分大家肯定不会搞混的就是“免疫-”，因为这三个应用都涉及到使用抗体，问题出在当你使用荧光剂来标记一抗或者使用荧光标记二抗的时候。IHC和ICC应用用中文来看很好区分，一个应用的样本类型是组织（IHC），另一个样本类型是细胞（ICC），可是一旦使用了荧光标记，大家似乎就有点不知道该用哪个了，因为免疫荧光指的就是使用了荧光标记，这时就很容易只写一个IF，而不去写明到底是组织（IHC）还是细胞（ICC）。这也是为什么小编个人不太喜欢用免疫荧光（IF）来作为一个应用命名的原因，因为免疫荧光不能提供给你足够的信息，只是告诉读者你用了荧光剂，可是这个一抗到底是用在组织上的还是细胞上的呢？所以小编认为，应用了荧光剂的IHC和ICC应该更名为IHF和ICF分别意为Immunohistofluorescence（免疫组织荧光）和Immunocytofluorescence（免疫细胞荧光），虽然这两个词汇在英文文献中应用的还不是很广泛，但绝对不是小编自己杜撰的哦，已经有些学者在使用了，规范化应该也只是时间的问题，现在来看几幅图片更好的区分他们吧！

先不看答案，你能看出这些分别是什么应用吗？

A. IHC (免疫组织化学) 使用小鼠抗HCN1单克隆抗体 (SMC-304) 对小鼠小脑的免疫组化分析. 固定: 室温下10% 福尔马林溶液处理 12-24小时. 一抗: 小鼠抗HCN1单克隆抗体, 1:1000, 室温下孵育1小时. 二抗: HRP/DAB 检测系统:生物素偶联的山羊抗小鼠, 链霉亲和素过氧化物酶, DAB 色原 (棕色), 室温下孵育30分钟. 复染色: Mayer氏苏木素 (紫色/蓝色) 细胞核染色, 250-500uL, 室温下5分钟.

B. ICC（免疫细胞化学）使用小鼠抗Hsp70单克隆抗体 (SMC-100) 对小鼠热休克的黑素瘤细胞的免疫细胞化学分析. 固定: 福尔马林. 一抗: 小鼠抗Hsp70单克隆抗体, 1:1000, 室温下隔夜孵育. 二抗: Biotin 山羊抗小鼠. 图片来自: Dr. Ewa Malusecka, Maria Sklodowska-Curie Memorial Cancer Ceter and Inst. Of Oncology, Poland.

C. IHF (免疫组织荧光) 使用小鼠抗Neuroligin 4单克隆抗体 (SMC-469) 对小鼠齿状回的免疫组织荧光分析. 固定: 甲醛固定石蜡包埋. 一抗: 小鼠抗Neuroligin 4单克隆抗体, 1:100. 二抗: FITC 山羊抗小鼠 (绿色). 复染色: DAPI (蓝色) 细胞核染色, 1:1000. 图片来自: Rachel Reith, NIH/NIMH.

D. ICF (免疫细胞荧光) 使用小鼠抗HO-1单克隆抗体 (SMC-131) 对人HeLa Cells的免疫细胞荧光分析. 固定: 室温下2% 甲醛处理20分钟. 一抗: 小鼠抗HO-1单克隆抗体, 1:100, 4℃下孵育12小时. 二抗: FITC 山羊抗小鼠 (绿色), 1:200, 室温下孵育2小时. 复染色: DAPI (蓝色) 细胞核染色, 1:40000, 室温下2小时. 染色定位: 微粒体. 内质网. 低氧时定位至细胞核. 放大倍数: 100x.

做完这个小测试之后是不是对这几个应用的区别有了更直观的了解了呢？小编再来给大家总结一下：

A图和B图是免疫化学（Immunochemistry），这种应用是用抗体检测目标蛋白然后利用化学反应来产生颜色变化。根据样本类型的不同，又分为免疫组织化学（A图）和免疫细胞化学（B图）。

C图和D图很明显的就是免疫荧光（Immunofluorescence），这种应用是用抗体检测目标蛋白然后通过偶联的荧光团来显色。同样根据样本类型的不同，又可分为免疫组织荧光（C图）和免疫细胞荧光（D图）。