裸鼠移植瘤动物模型建立

裸鼠肿瘤模型是比较常见和常用的一种肿瘤动物模型,它在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠肿瘤模型的接种一般有细胞接种瘤块接种两种方式,接种取材有手术活检标本癌性胸腹水标本体外培养的细胞系三种 。
裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短成瘤率高易于操作成本低的优点。
裸鼠移植瘤实验常用于检测细胞的成瘤能力/抗肿瘤药物的抗癌作用、

实验准备:

  1. 0.25%的胰酶,含血清的培养基,PBS或者生理盐水
  2. 1ml注射器,细胞计数器,酒精棉球

实验操作步骤:

  1. 将计数板及盖玻片冲洗干净,晾干
  2. 常规消化细胞,离心
  3. 加入适量PBS重悬细胞,使之成为单细胞悬液
  4. 按照一定稀释倍数西施细胞悬液
  5. 细胞计数
  6. 取5*10^6个细胞,再次离心收集细胞沉淀
  7. 用0.2mlPBS或者生理盐水重悬细胞,分别放入0.5ml的EP管中,封口膜封口
  8. 选择4~6周龄的裸鼠,将裸鼠背部皮肤消毒
  9. 用1ml注射器吸取细胞悬液,将其注射入裸鼠皮下
  10. 以后每天观察裸鼠生存情况以及移植瘤的情况,测量肿瘤大小
    11.待早肿瘤生长至直径约1.5~2cm大小时,脱颈法处死小鼠,取出肿瘤,称重,测量瘤体大小并计算体积
    12.统计学分析

注意事项

  1. 细胞重悬时要将细胞悬液制备成单细胞悬液
  2. 计数前应将细胞彻底混匀,稀释至合适的浓度,计数一定要精准

一般实验中要将裸鼠分组,应该采取随机分组的办法,并且每组裸鼠的数量原则上越多越好,但是考虑到实验成本,一般选取每组5~10只。预实验时,选择3只可以做统计学分析即可
细胞计数后,用PBS或者生理盐水重悬细胞时,最好不要超0.2ml。在接种细胞的数目上,一般情况选择5~1010^6个细胞。若是想很快就观察到成瘤情况,可以接种多一点,反之,少一点
在荷瘤裸鼠动物模型建立以后,可以观察的指标很多,比如
肿瘤体积(长0.5)**,绘制成瘤曲线
裸鼠存活时间
处理前后瘤体大小,重量
处理前后肿瘤的HE染色或者免疫组化染色 ,根据前期的实验设计来选择

乳房脂肪垫移植瘤:
细胞系:
ER(+):MCF-7(来源:乳腺腺癌),ZR-75-30(乳腺导管癌),T47D(乳腺导管癌),ZR-75(乳腺腺癌)。
ER(-):MDA-MB-435s(乳腺导管癌),MDA-MB-435(乳腺导管癌),SK-BR-3 (乳腺腺癌),MDA-MB-231(乳腺腺癌),MDA-MB-453(乳腺腺癌)。

作为乳腺癌细胞移植裸鼠的选择, 推荐:ER(+)选用MCF-7和ZR-75-30;ER(—)选用MDA-MB-435s和MDA-MB-231。这几株细胞成瘤率较高。
注意事项
①将HBC细胞植入裸鼠的乳房脂肪垫(Mammary fad pat,mfp),又称原位移植(相反则称异位移植),不仅可以提高乳腺癌细胞的成瘤率而且可以增加转移的发生率。
②促进肿瘤细胞在裸鼠体内形成肿瘤的方法是将癌细胞和Matrigel或成纤维细胞混合后注入裸鼠体内。Matrigel是由层粘连蛋白、Ⅳ型胶原纤维、硫酸乙酰肝素和巢蛋白组成的混合物,在4℃为液体,而在37℃则聚合形成一种凝胶。
③裸鼠的选择
Balb/c、 nu/nu雌性裸鼠 (SPF级),4-6周龄,体重18-22g,预实验选用Balb/c小鼠,用于mfp的解剖。
参考:
《细胞与分子生物学常用技术》
https://zhuanlan.zhihu.com/p/478791842
https://www.jingege.wang/2020/06/06/%E8%82%BF%E7%98%A4%E7%A0%94%E7%A9%B6%E5%BF%85%E7%94%A8%E6%A8%A1%E5%9E%8B%EF%BC%9A%E8%BD%AC%E7%A7%BB%E5%8A%A8%E7%89%A9%E6%A8%A1%E5%9E%8B%E7%9A%84%E6%9E%84%E5%BB%BA%EF%BC%88%E4%B8%8A%EF%BC%89%EF%BC%88/

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