裸鼠肿瘤模型是比较常见和常用的一种肿瘤动物模型,它在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠肿瘤模型的接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式,接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种 。
裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。
裸鼠移植瘤实验常用于检测细胞的成瘤能力/抗肿瘤药物的抗癌作用、
实验准备:
- 0.25%的胰酶,含血清的培养基,PBS或者生理盐水
- 1ml注射器,细胞计数器,酒精棉球
实验操作步骤:
- 将计数板及盖玻片冲洗干净,晾干
- 常规消化细胞,离心
- 加入适量PBS重悬细胞,使之成为单细胞悬液
- 按照一定稀释倍数西施细胞悬液
- 细胞计数
- 取5*10^6个细胞,再次离心收集细胞沉淀
- 用0.2mlPBS或者生理盐水重悬细胞,分别放入0.5ml的EP管中,封口膜封口
- 选择4~6周龄的裸鼠,将裸鼠背部皮肤消毒
- 用1ml注射器吸取细胞悬液,将其注射入裸鼠皮下
- 以后每天观察裸鼠生存情况以及移植瘤的情况,测量肿瘤大小
11.待早肿瘤生长至直径约1.5~2cm大小时,脱颈法处死小鼠,取出肿瘤,称重,测量瘤体大小并计算体积
12.统计学分析
注意事项
- 细胞重悬时要将细胞悬液制备成单细胞悬液
- 计数前应将细胞彻底混匀,稀释至合适的浓度,计数一定要精准
一般实验中要将裸鼠分组,应该采取随机分组的办法,并且每组裸鼠的数量原则上越多越好,但是考虑到实验成本,一般选取每组5~10只。预实验时,选择3只可以做统计学分析即可
细胞计数后,用PBS或者生理盐水重悬细胞时,最好不要超0.2ml。在接种细胞的数目上,一般情况选择5~1010^6个细胞。若是想很快就观察到成瘤情况,可以接种多一点,反之,少一点
在荷瘤裸鼠动物模型建立以后,可以观察的指标很多,比如肿瘤体积(长宽宽0.5)**,绘制成瘤曲线
裸鼠存活时间
处理前后瘤体大小,重量
处理前后肿瘤的HE染色或者免疫组化染色 ,根据前期的实验设计来选择
乳房脂肪垫移植瘤:
细胞系:
ER(+):MCF-7(来源:乳腺腺癌),ZR-75-30(乳腺导管癌),T47D(乳腺导管癌),ZR-75(乳腺腺癌)。
ER(-):MDA-MB-435s(乳腺导管癌),MDA-MB-435(乳腺导管癌),SK-BR-3 (乳腺腺癌),MDA-MB-231(乳腺腺癌),MDA-MB-453(乳腺腺癌)。
作为乳腺癌细胞移植裸鼠的选择, 推荐:ER(+)选用MCF-7和ZR-75-30;ER(—)选用MDA-MB-435s和MDA-MB-231。这几株细胞成瘤率较高。
注意事项
①将HBC细胞植入裸鼠的乳房脂肪垫(Mammary fad pat,mfp),又称原位移植(相反则称异位移植),不仅可以提高乳腺癌细胞的成瘤率而且可以增加转移的发生率。
②促进肿瘤细胞在裸鼠体内形成肿瘤的方法是将癌细胞和Matrigel或成纤维细胞混合后注入裸鼠体内。Matrigel是由层粘连蛋白、Ⅳ型胶原纤维、硫酸乙酰肝素和巢蛋白组成的混合物,在4℃为液体,而在37℃则聚合形成一种凝胶。
③裸鼠的选择
Balb/c、 nu/nu雌性裸鼠 (SPF级),4-6周龄,体重18-22g,预实验选用Balb/c小鼠,用于mfp的解剖。
参考:
《细胞与分子生物学常用技术》
https://zhuanlan.zhihu.com/p/478791842
https://www.jingege.wang/2020/06/06/%E8%82%BF%E7%98%A4%E7%A0%94%E7%A9%B6%E5%BF%85%E7%94%A8%E6%A8%A1%E5%9E%8B%EF%BC%9A%E8%BD%AC%E7%A7%BB%E5%8A%A8%E7%89%A9%E6%A8%A1%E5%9E%8B%E7%9A%84%E6%9E%84%E5%BB%BA%EF%BC%88%E4%B8%8A%EF%BC%89%EF%BC%88/