FluoTag-Q抗GFP来源于一种内部开发的单域抗体(sdAb),它能够以高亲和力和特异性识别GFP及其最常见的衍生物。
生物和生物发光领域的突破始于20世纪60年代,当时下村修及其同事从水母Aequorea victoria中发现了一种发光蛋白。然而,直到20世纪90年代初,绿色荧光蛋白(GFP)序列才被克隆,并作为一种荧光标记在异源生物体中使用。如今,在一个开源数据库中可以找到超过800条各种荧光蛋白的记录,其中目前可用的变体在荧光蛋白数据库“fpbase”中。
FluoTags可以配备单个荧光团以实现更定量的读出(FluoTag-Q),每个单域抗体可以结合两个荧光团(FluoTag-X2),NanoTag还开发了一种混合两种sdAb的结合物,它们同时与目标蛋白结合,每个都带有两个荧光团(FluoTag-X4)。
艾美捷FluoTag-X4抗GFP AbberiorStar460:
货号:N0304-Ab460-L
克隆号:1H1
宿主:羊驼
生产来源:大肠杆菌
应用:免疫荧光(IF)
注意:不建议使用该品进行Western blot检测蛋白质,因为sdAb主要识别天然/折叠的蛋白质。
稀释比例:1:1000(相当于最终浓度为5 nM)
靶标:GFP
特异性:识别GFP(绿色荧光蛋白)和常见的GFP衍生物,如EGFP、mEGFP、Sirius、tSapphire、Cerulean、eCFP、mTurquoise、acGFP、Emerald、超椭圆pHluorin、paGFP、superfolder GFP、eYFP、mVenus和Citrine。可能也识别尚未测试的其他衍生物。
配方:从含有2% BSA(美国来源)的PBS(pH 7.4)中冻干单个sdAb克隆。用200 µL去离子水中的50%甘油复溶。如果适用,建议添加0.1%叠氮化钠作为防腐剂。复溶后浓度为5 µM。
储存:含有冻干蛋白的安瓿可在4°C下保存6个月。建议用含有0.1%叠氮化钠防腐剂的50%无菌甘油水溶液复溶蛋白。通过分装复溶蛋白以减少冻融循环次数。长期保存在-80°C下,最长可达6个月。工作分装可在-20°C下保存长达4周。不建议将复溶后的蛋白在4°C下保存。
注意事项:仅用于体外/研究目的。无毒、无害、无传染性。

使用FluoTag-Q Atto 647N抗GFP sdAb(货号N0301-At647N,稀释比例1:500)对表达TOM70-GFP报告蛋白的PFA固定3T3细胞进行免疫染色(GFP信号以绿色表示,相应的FluoTag信号以红色表示,两个通道的合并以黄色表示)。细胞核通过DAPI染色(蓝色)可视化。
文献参考:
de Jong-Bolm D, Sadeghi M, Bogaciu CA, et al. Protein nanobarcodes enable single-step multiplexed fluorescence imaging. PLoS Biol. 2023;21(12):e3002427. Published 2023 Dec 11. doi:10.1371/journal.pbio.3002427 (IF; HEK293)
Shaib AH, Chouaib AA, Chowdhury R, et al. One-step nanoscale expansion microscopy reveals individual protein shapes. Nat Biotechnol. Published online October 9, 2024. doi:10.1038/s41587-024-02431-9
Candelas Serra M, Kuchtiak V, Kubik-Zahorodna A, et al. Characterization of Mice Carrying a Neurodevelopmental Disease-Associated GluN2B(L825V) Variant. J Neurosci. 2024;44(31):e2291232024. Published 2024 Jul 31. doi:10.1523/JNEUROSCI.2291-23.2024 (Cat. No. N0301-Ab635P-L; IF; STED; mouse hippocampal neurons)