组织RNA提取 Isolate RNA from tissue samples

1. 将组织在液氮中磨碎,每 50~100mg 组织加入 1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过 TRIzol 体积 10℅。

2. 可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质。可于 2~8℃ 10000× g 离心 10min,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量 DNA,上清中含有 RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

3. 每 1ml TRIzol 加入 0.2ml 氯仿,剧烈振荡 15s,室温放置 5min。

4. 2~8℃ 10000×g 离心 15min。样品分为三层。RNA 主要在水相中,水相体积约为所用 TRIzol 试剂的 60℅。

5. 把水相转移到新的 EP 管中加入等体积的异丙醇,室温放置 10min。

6. 2~8℃ 10000×g 离心 10min,离心前看不出 RNA 沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状白色沉淀。弃上清进行下一步操作。

7. 用 75℅冰预冷的乙醇洗涤 RNA 沉淀。每使用 1ml TRIzol 至少加 1ml 75℅乙醇。

2~8℃ 不超过 7500×g 离心 5min,弃上清。

8. 超净台中风干大约 5~10min。不要过于干燥,否则会导致 RNA 的溶解性大大降低。加入 25~200μl 无 RNase 的水使 RNA 溶解。

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