CRISPR载体介绍
CRISPR载体是用于基因编辑过程中传递和表达CRISPR系统所需的遗传信息的分子工具，被广泛应用于基因敲除、基因治疗等领域，其通常包括两部分核心组件：Cas9蛋白（或其他类似的Cas酶）和引导RNA（gRNA）。
CRISPR作用原理
Cas9蛋白是一种核酸酶，能切断DNA双链。gRNA通常由crRNA和tracrRNA组成，其中tracrRNA与crRNA结合，并帮助crRNA稳定地与Cas9蛋白相互作用；crRNA包含与目标DNA序列互补序列，能与Cas9蛋白结合并引导Cas9蛋白至靶点位置。然后Cas9蛋白在靶点位置切断DNA双链，触发DNA修复机制，在DNA修复过程中可能发生碱基插入、删除，导致基因失活，进而实现基因敲除、基因编辑等功能。
CRISPR载体类型
根据载体中包含的序列信息可以分为：gRNA和Cas9共表达载体，gRNA表达载体，Cas9表达载体。
gRNA和Cas9共表达载体
为了实现有效基因编辑，gRNA和Cas9需要在目标细胞中同时表达。gRNA和Cas9共表达载体即一个载体包含了Cas9和gRNA两个表达系统，其中Cas9基因通常通过II型启动子（如CMV启动子、EF1α启动子、UbC启动子等）驱动其在宿主细胞中的表达，gRNA通常通过U6、H1等启动子驱动表达。使用gRNA和Cas9共表达载体能简化实验流程，提高效率，通过一次转化实验就可以完成gRNA和Cas9的递送和表达。
gRNA表达载体
载体中只包含gRNA表达系统，需要连同Cas9表达载体共同转化细胞，或者转化Cas9稳转株细胞才能实现基因编辑功能。
Cas9表达载体
载体中只包含Cas9表达系统，需要连同gRNA表达载体共同转化细胞才能实现基因编辑功能。
