细胞复苏是指将冻存在液氮里边或者-80℃冰箱中的细胞解冻，再培养传代。细胞复苏应采用快速融化的方法，这样的目的是为了让细胞外结晶在很短的时间内融化，从而避免慢悠悠的融化，使得水分渗入细胞内再结晶，从而对细胞再次造成伤害，从而影响细胞的存活率。
由于各种细胞的培养方式大概不太一样，所以就不再详细介绍，今天仅仅说一下细胞复苏的一个大概的注意事项，给各位稍微提个醒。
1. 快速融化的真实原因则是为了防止小冰晶形成大的冰晶，也就是冰晶的一个重结晶。也就是意味着从液氮中取出来的冻存管，要立即浸入37℃温水中，尽量在1min内融化。
解冻后的细胞直接接种于含有完全培养基的细胞培养瓶或者培养皿中直接培养，过夜后进行换液，目的是将冻存液中的DMSO去除掉，但是如果我们所培养的细胞对冷冻保护剂很敏感的话，解冻后的细胞应先通过离心去除保护剂，再接种到含完全培养基的培养瓶或者培养皿中。这里所提到的离心，无非就俩目的，一个是去除DMSO，一个是去除死细胞。
2. 冻存管的炸裂问题。这个是特别需要注意的，以前师姐提醒的时候还没怎么注意，直到它在我手里炸了两次之后，长记性了。冻存管容易爆炸的原因主要为液氮会渗入到冻存管中，取出后，也但容易挥发，导致体积迅速膨胀，但是又不能及时的排出引起爆炸；或许是冻存管质量差，或者盖子没拧紧。针对于这个问题可以从以下几个方面稍微避免一下：
（1）取放置冻存管的冻存盒的时候要戴好防冻手套以及护目镜，准备好镊子；
（2）推荐使用内旋的冻存管，毕竟内旋的冻存管，易于排出，不宜爆炸；
（3）但是如果没有内旋的，只能用外旋的冻存管的话，取出后尽快倒置/水平放置数十秒，使得液氮流出；
（4）可以先放到-80℃的冰箱中，等液氮挥发干净后，再去复苏，或者是把管子放置于冰上，等到液氮挥发后，再进行复苏；
（5）平常我自己复苏细胞的时候，都会在地上先放一些吸水纸或者比较吸水的毛巾，取出后立即将存放冻存管的冻存盒侧放在上边，等液氮挥发干净后再复苏细胞；
（6）关于冻存细胞时，是否贴上封口膜的问题吧，有经验的呢，都会发现加不加都一样的。
细胞复苏的过程中，很重要的一点就是避免培养基的过度碱性。建议在放入冻存管内容物之前，将含有培养基的培养容器放入培养基中至少15min，以便培养基达到正常的PH值。有的人会采用预热的培养基来稀释冻存的细胞。
解冻后的细胞可以直接接种于含完全培养基的细胞培养瓶中直接培养，过夜后再用新鲜的培养基替换，以去除DMSO，但如是细胞对于冷冻保护剂很敏感的话，需要解冻后，先通过离心去除冷冻保护剂，再接种到含有完全生长培养液的培养瓶中。但是有时候需要对离心的时间和转速需要控制一下，难养的要降低转速，缩短时间，减少离心对细胞的伤害。但如果要是需要离心的话，解冻速度一定要快，因冻存液中的DMSO对细胞的毒副作用比较大，必须在一分钟之内完全融化，如果复苏的温度太慢，就会造成对细胞的损伤
至于复苏后是否成功，需要一个大概的一个标准，要根据接种后细胞的形态和贴壁率而定，倘若第二天有95%以上的细胞贴壁，且形态良好，则说明复苏成功。复苏接种的时候，采用较高的接种密度，使细胞的整体密度高一些，有利于细胞的生长。
