从CNV到FPKM

Create: 2019-03-14

在看CONTRA的脚本,了解CNV分析方法,顺带查找一下其他的CNV分析软件,就看到了FishingCNV,基于RPKM,学习了一下相关知识,记录如下:

1.CNV分析相关资料

  1. CONTRA
  2. TCGA的28篇教程之CNV那点事
  3. WES的CNV探究-conifer软件使用
  4. 单个样本NGS数据如何做拷贝数变异分析呢
  5. CODEX2

2. 标准化

参考:RNA-seq中的那些统计学问题(二)FPKM/RPKM之外的那些标准化方法

1.1 Housing-Keeping基因

孟浩巍《生物信息学100个基础问题 —— 第38题 当转录组普遍变化时RNA-Seq怎么进行分析(1)?》

1.2 TCS Total count scaling

缩放因子的概念
像CONTRA 中就取了一个list,各元素为样本mapping上的bases总数,计算list中元素的几何平均数,缩放因子即为goem_ave/g[i]

1.3 Median of Ratio (DEseq2)

1.4 TMM trim mean of M value (edgeR)

3. FPKM RPKM TPM概念

定义:

FPKM.png
TPM.png

参考:

关于readsCount、RPKM/FPKM、RPM、TPM的理解
生物信息学100个基础问题 —— 第35题 RNA-Seq 数据的定量之RPKM和FPKM
生物信息学100个基础问题 —— 第36题 RNA-Seq 数据的定量基本假设以及TPM

理解:

1、 FPKM计算的是基因的相对表达量,如果两个样本A和B,均发生基因水平的上调,则FPKM/RPKM这个值是不会改变的。
2、 FPKM有效校正了不同样本测序导致的总reads数不同导致的错误,且考虑到了exon长度的问题

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