第一代测序原理

Sanger测序

反应体系中存在大量相同的待测序片段；向反应液中加入DNA合成酶和dNTP(Normal Nucleotide， 脱氧核糖核苷三磷酸--碱基)合成新的DNA链，同时加入ddNTP(didenoxynuleotide， 双脱氧核糖核苷三磷酸)

图1.1 dNTP and ddNTP

由图1.1 可以看出，与普通的dNTP相比，ddNTP在脱氧核糖3’位置上的羟基被氢取代，不能与后续的dNTP形成磷酸二脂键，所以导致合成终止

加热（94）-退火（50℃） 使测序引物与目标序列结合

随后在DNA聚合酶的作用下合成大量不同长度的DNA片段

图1.2

图1.3

分别将加入4种ddNTP的反应后的产物加入4个泳道，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据四种碱基的条带位置，经过反推得到DNA序列信息（由于小片段在前，大片段在后，因此需要逆向读取序列）

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