一、 目的：
掌握逆转录和半定量PCR的基本原理和操作过程。
二、原理：
1.逆转录的基本原理
提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。
2.半定量PCR的基本原理
是近年来常用的一种简捷的定量RNA测定方法，通过mRNA反转录成cDNA，再进行PCR扩增目的基因，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量。需要将目的基因与管家基因（如β-actin）电泳条带的相对含量进行比较，观测目的基因表达的强弱。
具有较高的灵敏性、操作简单等优点，常用于基因定量分析、生物学检测等，此外常用逆转录PCR克隆目的基因。
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3、电泳检测：
1）用1×TBE电泳缓冲液制作2%琼脂糖凝胶，加1×TBE电泳缓冲液覆盖凝胶。
2）用微量移液器取PCR产物样品5μl及1μl 的6×加样缓冲液，混匀后，用微量移液器小心加入点样孔。
3）打开电源开关，调节电压至110V，使RNA由负极向正极电泳，约20min后将凝胶放在凝胶成像仪上观察RNA电泳结果。
四、注意事项：
1、RNA抽提质量要好；
2、注意污染和避免RNA降解；
3、内参常用的有β-actin和GAPDH。
