细胞周期是指细胞自一次分裂完成至下一次分裂终了的全过程,其可分为间期与分裂期两大阶段。在正常的细胞周期中,分裂间期持续的时间远远大于分裂期,几乎占到细胞整个周期的90%左右。所以细胞周期分析中,主要是研究细胞的分裂间期的细胞生命活动,而细胞在周期活动中,不同时期,其DNA的含量有所不同。利用这一特性,DNA含量成为了一项关键的分析指标,尤其是在一些癌变细胞,或者药物干预后的细胞出现异常生物活动的时候,被广泛应用于肿瘤,免疫等科学研究中。
1细胞分裂间期DNA含量
G0/G1期:DNA合成前期,为DNA合成做好物质准备,DNA含量为2N
S期:DNA的合成期,此时期完成DNA的合成、合成与DNA组装构成染色质等相关组蛋白,DNA的含量增加,在2N-4N范围间
G2/M期:DNA合成后期,DNA复制结束,开始分裂准备,DNA含量为4N
根据细胞不同周期时的DNA含量的不同,去检测DNA含量,选择一些能与DNA结合的荧光染料(如PI,DAPI等),让其紧密嵌入双链DNA结构中,结合后可以产生荧光信号,其荧光信号的强度和双链DNA的含量成正比。染色后,利用流式细胞仪这一精密仪器,可以对细胞的DNA含量进行定量测定,进而根据DNA分布模式的差异,深入分析细胞周期的不同阶段及凋亡状态。
2细胞周期检测试剂盒特点
>适用于多种贴壁、悬浮细胞样本
>区分不同时期细胞占比
>方法简单,操作简便
>无需额外使用其他昂贵试剂
武汉尚恩生物细胞周期检测试剂盒设计灵活,适用于贴壁培养及悬浮状态下的细胞周期检测。若需对组织样本进行细胞周期分析,则需先通过消化处理将组织解离成单细胞悬液,以便后续的检测流程能够顺利进行。
3实验流程
4实验案例
▲Jurkat细胞70%乙醇固定过夜后细胞周期试剂盒(SNK-015)流式检测结果
5结果解读
假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1~2之间。
如果样品中有凋亡细胞存在,由于细胞核发生浓缩以及DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失,因此凋亡细胞在染色后呈现明显的弱染,即荧光强度小于1,在流式检测的结果图上出现所谓的sub-G1峰,即凋亡细胞峰。成为识别凋亡细胞的重要标志。