PLINK+TASSEL做GWAS+Post-GWAS分析

此视频来自B站,是非常好和全的的一个GWAS操作的视频,从开始准备软件下载,数据过滤,到最后的候选基因注释。
GWAS的实战视频
https://www.bilibili.com/video/BV1f44y1t7Jk?from=search&seid=12908459299918140554&spm_id_from=333.337.0.0

LD


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流程:


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怎么安装软件:


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VCF格式1:不需要填充:


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VCF格式2(原始):需要处理:


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首先基因型填充
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填充后(PLNIK):


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admixture: k = 1-13


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根据VC,选取使用P文件


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TASSEL:亲缘关系:


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hapmap格式文件:


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以下都为:TASSEL
VCF转为hapmap:

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GLM使用时,要去除群体结构文件中的最后一列,需要保证三列和小于1.表型文件并且admiture的文件,在表型最前面加如covriances。


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MLM加入亲缘关系:


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表型数据中为单个表型:两列

安装R包


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普通曼哈顿图:


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CMplot:


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RColorBrewer包调控颜色:


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筛选显著值:第二:峰中的其他位点是受最大的影响,所以进行clump清理,根据LD值处理。


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染色体注释
上下100kb进行注释。
准备基因位置文件:


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基因功能注释文件:


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输入文件:


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使用perl进行注释:
先基因定位:


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再对基因进行功能注释:


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有重复的需要删除。

对结果再行筛选
Camoco预测候选基因。安装软件


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构建数据库


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Camoco的文章:
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建立参考基因组:


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GFF文件格式:


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需要将csv格式,使用最后代码将数据分开。
根系文件:


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GO


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计算:


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test.txt


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再进行GO富集分析,网站直接进行。

区段关联分析

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PLINK(文件格式转换)和TASSEL(关联分析)进行(windows版本)。


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VCF(基因文件)改为ped,map


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首先确定基因的目标区段:annotation文件:


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从基因里查出内部及上下游50k的所得SNP


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导入基因型:


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关联分析:数据筛选


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数据整合:


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关联分析:


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LD 分析:


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根据TASSEL根据选出的SNP再次进行MLM分析,得到结果后,再次进行LD分析,

将基因型和关联分析结果导出。再使用R进行画图:
关联结果只需要marker,POS,P值,三列。
需要报: LDheatmap, genetics包,读数据:记得加as.is=T


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p值转为-log10()

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候选基因还是很多(GWAS步骤),可以构架一个WGCNA调控网络

基本概念:


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主要数据:


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基本流程:输入数据
基因表达矩阵:


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性状矩阵(必须为数值型数据)


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