1.测序的原理
1.1 一代测序的原理
一个很好的引用故事
假设我是瞎子,而每个珍珠摸上去都一模一样,我该如何弄清楚珍珠项链的顺序呢?好在我很幸运地拥有一个项链复制机(DNA聚合酶)可以帮我复制珍珠项链,只不过复制出来的颜色是反着的。而我又有一包穿孔的黑珍珠和一包穿孔的白珍珠可以为机器提供复制的原材料。现在我能不能搞清楚珍珠项链的顺序了呢?Sanger先生的办法是这样的:
把白色的穿孔珍珠中间挑出一小部分,把一侧的孔给堵住,做成一侧有孔的白色珍珠。若是复制机在本来该串白色珍珠的地方串到一个一侧有孔的白色珍珠,就会停下来不再继续。
把模板珍珠项链、黑白穿孔珍珠和一侧有孔的白色珍珠全部提供给复制机,机器就会不断复制出不完整的反色项链。
这样我得到了很多不完整的项链片段,它们有两个共同点:一端都一样,另一端都是白色的。我数一下这些片段的长度,可以得到这样的信息:
W
???W
??????W
?????????W
……
仔细分析,这些信息已经够我推测出原本的项链排列是:B??B??B??B…了,考虑到这个项链只有黑白两色,我可以不用换堵黑色珍珠的孔再做一遍实验就可以得知原本的项链是BWWBWWBWWB…的序列了。
把这个想象成ATGC的四个珠子,就很容易理解了
2.测序的比较