本文选自 molecular cancer，https://doi.org/10.1186/s12943-020-01196-4，喜欢的朋友可以自行下载。
不废话，上图。
本文是一篇常规套路CIRCRNA研究。一起学习一下吧。
越来越多的证据表明，环状 RNA（circRNA）是癌症进展的重要参与者。 然而，尚不清楚circRNA 在胰腺导管腺癌（PDAC）中的生物学过程和潜在机制。在本研究中，鉴定了PDAC 患者队列中上调的新型 circRNA（称为 circBFAR，hsa_circ_0009065）。 circBFAR 的异位表达与肿瘤淋巴结转移（TNM）呈正相关，并且与 PDAC 患者的预后较差有关。 此外，circBFAR 敲低极大地抑制了体外 PDAC 细胞的增殖和运动，并在体内模型中促进了肿瘤的转移和转移。 从机制上讲，circBFAR 通过使 miR-34b-5p 海绵化而上调了间充质-上皮转化因子（MET）的表达。 此外，circBFAR 过表达增加了 MET 的表达并激活了 Akt 的下游磷酸化（Ser 473），并进一步激活了 MET / PI3K / Akt 信号传导途径，最终促进了 PDAC 细胞的进程。 重要的是，应用 MET 抑制剂可以显着减轻 circBFAR 介导的体内肿瘤发生。
作者先是测序了一波，然后和TCGA数据库进行综合分析（也就是看看那些升高了的和生存相关），得到两个上调的circRNA，但是只有本文研究的这个在PDAC中高表达。
通过Sanger 测序，提示本文研究的这个circRNA来自BFAR.长度为 336 nt,会聚引物和发散引物，分别用于扩增 BFAR mRNA 和环状形式 circBFAR。桑格测序证实，使用不同引物扩增的 PCR 产物包含circBFAR 的头对尾剪接位点，且该序列与 circBase数据库注释一致（图 1c）。 随后，使用不同模板的不同引物 PCR 证实了 cir-cBFAR 的存在.(据我所知，聚合引物只能合成线性的RNA，发散引物用于合成环状的RNA,其实上面这些都是套路。然后FISH定位什么的，再功能分析，再动物，最后临床来一波，完事。），然后用RNAase消化，证实了这种circRNA具有抗性，同时也验证了他的存在。
鉴于 circRNA比线性 RNA 更稳定，进一步分析了 cir-cBFAR 在PDAC 细胞中的稳定性。 用放线菌素 D 抑制 RNA 转录后，circBFAR 转录物的半衰期明显长于线性 BFAR，表明circBFAR 在 PDAC 细胞中高度稳定。
然后，作者开始做功能学实验了。也就是高表达的抑制，低表达的诱导，同时看看HOST GENE的表达情况.直接上图吧，没什么可说的，也就是这个circRNA促进了肿瘤的侵袭、进展之类的。
，作者进一步验证了这个circRNA在体内的表现。敲黑板了，以前不知道裸鼠和SCID鼠到底有什么区别，其实，裸鼠只是缺乏成熟的T细胞，SCID鼠T、B细胞在生成上都受到抑制，今天还发现一个困扰我很长时间的问题，就是裸鼠皮下瘤会不会转移的问题，并不会。
下一步，做circRNA的靶点。一方面是预测，一方面是结合，一方面是功能学分析。这种做pull down 的难道都是这么做吗，做完正拉，还要做反向下拉才行啊！作者发现circRNA和miR之间没有线性相关，然后，得出了一个这个circRNA并不影响miR表达的结论。脑洞比我都新奇啊。在下佩服。由此也可见，那些做生信分析，做相关性分析的有什么用？？
盲猜下面做miR的功能学实验。
下一步，miR的靶点及功能。我还特地去查了一下这个GSE98601，其实，这个数据过表达了miR-34b，看看基因表达水平变化，这里做的是乳腺癌，这也行？？？脑洞越来越新奇了呢。MET/AKT轴这个也是经典通路 啊。作者看着就是省懒事。
接下来，作者又是一通关于circRNA与miR的联合功能学分析。
circRNA和MET的相爱相杀。
然后，一波动物实验，在加上MET/AKT轴的药物进行验证，最后，点题临床的意义，全文结束。
好吧，文章分享结束，看完molecular cancer的文章，怎么有一种我也行的错觉呢？欢迎批评，指正！！
