bismark 识别甲基化位点

bismark中,根据甲基化的C所处的上下文环境,分成以下3类;

  1. CpG

  2. CHG

  3. CHH

p代表磷酸二酯键,CpG指的是甲基化的C的下游是1个G碱基。H代表除了G碱基之外的其他碱基,即A, C, T中的任意一种,CHG代表甲基化的C下游的2个碱基是HG, CHH表示甲基化的C下游的两个碱基都是H

bismark 比对完之后,会生成1个bam 文件。使用bismark_methylation_extractor命令可以从bam 文件中识别到甲基化的C,命令如下

bismark_methylation_extractor —comprehensive test/test_data_bismark_bt2.bam

只有1个参数,这个bam 文件是bimark比对生成的bam文件,每个样本一个bam文件。

默认情况下,软件会自动根据两个因素生成结果文件

  1. 甲基化的C的类型
    就是前面提到的CpG, CHG, CHH 3种类型

  2. 比对情况
    包括比对到四条链上OT, OB, CTOT, CTOB 4种情况
    所以会生成 3 X 4 = 12 个文件,对于链特异性文库来说,会生成3 X 2 = 6 个文件,这6个文件内容是类似的,都是记录了甲基化的C的染色体位置。

comprehensive选项的作用就是在生成最终文件时,只考虑3种甲基化类型,将所有的比对情况进行合并,这样最终只会生成3个文件.

CpG_context_test_data_bismark_bt2.txt
CHG_context_test_data_bismark_bt2.txt
CHH_context_test_data_bismark_bt2.txt

CpG_context_test_data_bismark_bt2.txt为例,内容如下:

Bismark methylation extractor version v0.19.0
SRR15024317_length=86   -       1       57798691        z
SRR15024319_length=86    +       2       10166600        Z
SRR15024331_length=86  +       11      77736289        Z
SRR15024338_length=86  +       3       197272186       Z

共5列,第一列为比对上的序列ID,第二列为基因组的正负链信息,第三列为染色体编号,第四列染色体上的位置,第5列为甲基化的C的状态。

不同字母表示不同的甲基化C:

X 代表CHG中甲基化的C
x  代笔CHG中非甲基化的C
H 代表CHH中甲基化的C
h  代表CHH中非甲基化的C
Z  代表CpG中甲基化的C
z  代表CpG中非甲基化的C
U 代表其他情况的甲基化C(CN或者CHN)
u  代表其他情况的非甲基化C (CN或者CHN)

对于CpG, 采用字母X的大小写来表征甲基化状态;对于CHG, 采用字母H的大小写来表征甲基化状态;对于CHH, 采用字母Z 的大小写来表征甲基化状态。

上面的文件是methylation calling 最直接的证据,但是对于甲基化水平的定量来说,缺少了相关信息。运行bismark_methylation_extractor时,除了生成上述文件之外,还会有下列3个文件

test_data_bismark_bt2_splitting_report.txt
test_data_bismark_bt2.M-bias.txt
test_data_bismark_bt2.M-bias_R1.png

test_data_bismark_bt2_splitting_report.txt

记录了该样本甲基化的汇总信息

Final Cytosine Methylation Report
Total number of C’s analysed:    40348
Total methylated C’s in CpG context:    1365
Total methylated C’s in CHG context:    21
Total methylated C’s in CHH context:    103
Total C to T conversions in CpG context:    678
Total C to T conversions in CHG context:    10076
Total C to T conversions in CHH context:    28105
C methylated in CpG context:    66.8%
C methylated in CHG context:    0.2%
C methylated in CHH context:    0.4%

test_data_bismark_bt2.M-bias.txt

定义了每一个甲基化位点的详细信息,%methylation就是我们定量常用的beta 值
部分文件内容如下

CpG context
position        count methylated        count unmethylated      % methylation   coverage
1       42      13      76.36   55
2       31      9       77.50   40

test_data_bismark_bt2.M-bias_R1.png


双坐标轴图,左侧的纵轴代表甲基化比例,右侧的纵轴代表甲基化的数目,横坐标代表测序读长。


©著作权归作者所有,转载或内容合作请联系作者
  • 序言:七十年代末,一起剥皮案震惊了整个滨河市,随后出现的几起案子,更是在滨河造成了极大的恐慌,老刑警刘岩,带你破解...
    沈念sama阅读 214,922评论 6 497
  • 序言:滨河连续发生了三起死亡事件,死亡现场离奇诡异,居然都是意外死亡,警方通过查阅死者的电脑和手机,发现死者居然都...
    沈念sama阅读 91,591评论 3 389
  • 文/潘晓璐 我一进店门,熙熙楼的掌柜王于贵愁眉苦脸地迎上来,“玉大人,你说我怎么就摊上这事。” “怎么了?”我有些...
    开封第一讲书人阅读 160,546评论 0 350
  • 文/不坏的土叔 我叫张陵,是天一观的道长。 经常有香客问我,道长,这世上最难降的妖魔是什么? 我笑而不...
    开封第一讲书人阅读 57,467评论 1 288
  • 正文 为了忘掉前任,我火速办了婚礼,结果婚礼上,老公的妹妹穿的比我还像新娘。我一直安慰自己,他们只是感情好,可当我...
    茶点故事阅读 66,553评论 6 386
  • 文/花漫 我一把揭开白布。 她就那样静静地躺着,像睡着了一般。 火红的嫁衣衬着肌肤如雪。 梳的纹丝不乱的头发上,一...
    开封第一讲书人阅读 50,580评论 1 293
  • 那天,我揣着相机与录音,去河边找鬼。 笑死,一个胖子当着我的面吹牛,可吹牛的内容都是我干的。 我是一名探鬼主播,决...
    沈念sama阅读 39,588评论 3 414
  • 文/苍兰香墨 我猛地睁开眼,长吁一口气:“原来是场噩梦啊……” “哼!你这毒妇竟也来了?” 一声冷哼从身侧响起,我...
    开封第一讲书人阅读 38,334评论 0 270
  • 序言:老挝万荣一对情侣失踪,失踪者是张志新(化名)和其女友刘颖,没想到半个月后,有当地人在树林里发现了一具尸体,经...
    沈念sama阅读 44,780评论 1 307
  • 正文 独居荒郊野岭守林人离奇死亡,尸身上长有42处带血的脓包…… 初始之章·张勋 以下内容为张勋视角 年9月15日...
    茶点故事阅读 37,092评论 2 330
  • 正文 我和宋清朗相恋三年,在试婚纱的时候发现自己被绿了。 大学时的朋友给我发了我未婚夫和他白月光在一起吃饭的照片。...
    茶点故事阅读 39,270评论 1 344
  • 序言:一个原本活蹦乱跳的男人离奇死亡,死状恐怖,灵堂内的尸体忽然破棺而出,到底是诈尸还是另有隐情,我是刑警宁泽,带...
    沈念sama阅读 34,925评论 5 338
  • 正文 年R本政府宣布,位于F岛的核电站,受9级特大地震影响,放射性物质发生泄漏。R本人自食恶果不足惜,却给世界环境...
    茶点故事阅读 40,573评论 3 322
  • 文/蒙蒙 一、第九天 我趴在偏房一处隐蔽的房顶上张望。 院中可真热闹,春花似锦、人声如沸。这庄子的主人今日做“春日...
    开封第一讲书人阅读 31,194评论 0 21
  • 文/苍兰香墨 我抬头看了看天上的太阳。三九已至,却和暖如春,着一层夹袄步出监牢的瞬间,已是汗流浃背。 一阵脚步声响...
    开封第一讲书人阅读 32,437评论 1 268
  • 我被黑心中介骗来泰国打工, 没想到刚下飞机就差点儿被人妖公主榨干…… 1. 我叫王不留,地道东北人。 一个月前我还...
    沈念sama阅读 47,154评论 2 366
  • 正文 我出身青楼,却偏偏与公主长得像,于是被迫代替她去往敌国和亲。 传闻我的和亲对象是个残疾皇子,可洞房花烛夜当晚...
    茶点故事阅读 44,127评论 2 352

推荐阅读更多精彩内容