RAW264.7细胞是常见的小鼠肝脏巨噬细胞系，由ATCC公司提供，可以用于许多生物医学研究。在实验室中，为了得到足量的细胞供应，需要进行RAW264.7细胞的传代。本文将详细介绍RAW264.7细胞传代的方法和相关注意事项。
- 原料和仪器
RAW264.7细胞需要的原料包括培养基（DMEM/F12、FBS、青霉素-链霉素等）和PBS缓冲液。传代需要的仪器包括离心管、培养皿、吸管、移液器、显微镜等。 - RAW264.7细胞传代方法
（1）培养皿处理
将新的培养皿清洗干净，用PBS缓冲液清洗3次，去除残留物。
（2）收割细胞
当培养皿中的细胞生长至80%以上时，用PBS缓冲液清洗1次，加入1 mL的胰酶-EDTA消化液（0.25%胰酶和0.02% EDTA）处理15-20分钟，直到细胞边缘开始发生离层。
用移液器和吸管吸取培养皿中的细胞，放入离心管中。
（3）离心细胞
将离心管放到离心机中，以1000rpm的速度离心5分钟，将上清液吸出，用PBS缓冲液洗涤1次，离心机操作使用前培训好。
（4）调配培养基
将DMEM/F12培养基加入10%的FBS，加入1%的青霉素-链霉素，混合均匀。
（5）吸管分装
倒入培养基至培养皿中2/3，预热至37℃。将离心管中的细胞用吸管吸取，加入培养皿中，轻轻摇晃培养皿，使细胞均匀分布。
（6）培养细胞
将培养皿放入孵化箱中，保持37℃，5%CO2的条件下，密闭培养。每隔一天换一次培养基。
（7）传代细胞
当培养皿中的细胞生长至80%以上时，用PBS缓冲液清洗1次，加入1 mL的胰酶-EDTA消化液（0.25%胰酶和0.02% EDTA）处理15-30分钟，直到细胞边缘开始发生离层。
重复第（2）～（6）步，将细胞传代1-3次。
- 注意事项
（1）细胞消化时间需要控制好，过短会导致细胞死亡，过长会损伤细胞。
（2）吸管和移液器需要经过高温高压灭菌处理。
（3）禁止药物混用。
（4）检查培养皿是否有悬浮细胞，清除悬浮细胞。
（5）培养皿一定要消毒干净。
（6）移液器等器材要分别使用，防止交叉感染。
（7）严格按照操作规程进行实验，出现异常情况及时反馈。
以上是RAW264.7细胞传代方法的详细介绍。如果在实验中遇到问题，可以咨询专业人员进行解决。通过正确的传代方法，可以获得足量的细胞供应，为后续的实验研究提供重要的基础条件。
